1999 Fiscal Year Annual Research Report
EBウイルスEBNA-1結合性細胞蛋白特にDNA複製開始反応関連蛋白の検索
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10670296
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| Research Institution | Aichi Cancer Center |
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Principal Investigator |
藤田 雅俊 愛知県がんセンター, ウイルス部, 主任研究員 (30270713)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鶴見 達也 愛知県がんセンター, ウイルス部, 部長 (90172072)
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| Keywords | EBウイルス / EBNA-1 / DNA複製 / ヒトMCMタンパク / ヒトCDC6タンパク / ヒトORCタンパク |
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| Research Abstract |
本研究の目標はEBVゲノム複製保持機構であるOri P-EBNA-1複製系の解明である。現在、細胞DNA複製開始反応関係因子がOri P複製においても重要な役割を担っているものと考えられている。我々が現在想定している、複製の細胞周期調節の仮説モデルは以下の様である。hORC-hCDC6は核マトリックス上に存在しており、そこでhORCに結合しているクロマチン領域が複製開始点の基点となる。G1期にhORC-hCDC6が、hMCM6量体をクロマチン領域に結合させる。S期にhMCMはリン酸化によって活性化され、未だ不明だが複製に必須の役割を行い、その後クロマチンから遊離する。一旦遊離したMCMはCdkキナーゼによるリン酸化によって、次のG1期までクロマチンヘの再結合が抑制される。これらDNA複製蛋白がOri P複製系の制御も行っているとすると、考えられる可能性は、EBNA-1がこれらの蛋白との結合等の相互作用をしているということであると思われたので、それを検討した。しかし、種々の技術を駆使して、複製開始制御蛋白とEBNA-1との相互作用の同定を試みたが、有意な結果は得られなかった。最近の、EBNA-1がOri Pからの複製に必須ではないかもしれないとの報告とも考え合わせると、その複製はむしろ細胞因子に完全に依存しており、EBNA-1はそれを増強しているだけなのかもしれない。今後は、EBNA-1および細胞複製開始蛋白が、EBVゲノムとin vivoで結合しているのかどうか、結合しているならどの部位に結合しているのか、そしてそれがどのような細胞周期調節を受けているのか、を明らかにすることが重要であると思われる。現在クロマチン免疫沈降法を用いてその検討を進めつつある。
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[Publications] Fujita, M.: "Cell cycle regulation of human CDC6 protein : intracellular localization, interaction with the human MCM complex and CDC2 kinase-mediated byperphosphorylation"J. Biol. Chem.. 274. 25927-25932 (1999)
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[Publications] Goto, H.: "Identification of a novel phosphorylation site on histone H3 coupled with mitotic chromosome condensation"J. Biol. Chem.. 274. 25543-25549 (1999)
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[Publications] Yokoyama, N.: "Assembly of the Epstein-Barr virus BBLF4, BSLF1, and BBLF2/3 proteins and their interactive properties"J. Gen. Virol.. 80. 2879-2887 (1999)
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[Publications] Fujita, M.: "Cell cycle regulation of DNA replication initiation proteins in mammalian cells"Frontiers in Bioscience. 4. 816-823 (1999)
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[Publications] Arata, Y.: "Cdk2-dependent and ?independent pathways in E2F-mediated S phase induction"J. Biol. Chem.. 275. 6337-6345 (2000)
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[Publications] Fujii, K.: "The Epstein-Barr virus pol catalytic subunit physically interacts with the BBLF4/BSLF1/BBLF2/3 complex"J. Virol.. (in press).
