2000 Fiscal Year Annual Research Report
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10670403
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
大澤 資樹 山形大学, 医学部, 教授 (90213686)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 弘志 山形大学, 医学部, 助手 (10142217)
武市 早苗 東海大学, 医学部, 教授 (20035497)
湯川 修弘 東海大学, 医学部, 助教授 (30240154)
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| Keywords | ABO式血液型 / ヒト抗体 / Bルンパ球 |
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| Research Abstract |
ABO式血液型における抗Aおよび抗B抗体のヒト組換え抗体を作製する目的において、抗体可変部位のクローニングおよびその配列特徴の検討を行っている。特異抗体クローン化の方法としては、末梢血リンパ球をEBウィルスで形質転換し希釈の後プレートにまき培養を行ない、培養上清の分析により特異抗体産生株を選び出している。検出方法としては、α2マクログロブリンないし人工抗原を固相化したプレートを用いたELISA法を利用している。そして、オリゴクローン化された細胞からRT-PCR法にてイムノグロブリンH鎖L鎖の可変部位を取りだし、べクターに挿入し大腸菌にて発現させ目的の組換え蛋白を選択している。組換え抗体の特異的反応性の確認としてはELISA法のみでは不充分であり、凝集反応を行なったが感度が低く問題があった。そこで、赤血球を使ったフローサイトメトリー法を採用し、組換え抗体のAないしB抗原への特異性を現在では確認できている。抗A抗B組換え抗体を現在までに各々4クローン程度を得ており、配列解析の結果H鎖に比較的共通したものが認められると判断している。しかし、まだクローン数も少なくさらに数を増やし、抗原認識部位の解析を行なうとともに、特異性および親和性の高いクローンを得られるよう実験を継続している。法医実務では、ヒト抗血清の市販が中止されマウスモノクローナル抗体の利用が普及しつつあるが、問題もでてきており本研究の価値が増加してきていると考え研究開発を急いでいる。
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