1998 Fiscal Year Annual Research Report
天然薬物の抗炎症作用および抗ウイルス作用の分子機構に関する基礎医学的研究
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10670424
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
大槻 健蔵 北里大学, 医療衛生学部, 教授 (60124559)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森島 直彦 北里大学, 看護学部, 助教授
古屋 禎祐 北里大学, 医療衛生学部, 講師 (70050630)
田中 勇悦 北里大学, 理学部, 助教授 (30163588)
近藤 啓文 北里大学, 医学部, 教授 (70124922)
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| Keywords | 抗炎症作用 / 抗ウイルス作用 / プロテインキナーゼ / グリチルリチン / シグナル伝達系 / リン酸化阻害 / 天然薬物 |
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| Research Abstract |
1. 抗炎症剤グリチルリチン(GL)結合性protein(gbP)の分離精製
GL-affinityカラムを作製し,HIV-1の構成proteinおよびそのリコンビナント(RT,proteaseやRevなど)を結合性polypeptide(gbP)として精製した.
2. gbPのCK-IIによるリン酸化とその生理的意味
HIV-1の遺伝子産物であるRT,proteaseやRevなどは,CK-IIによるリン酸化サイトを複数持っている.そこで,CK-IIによるRT,ProteaseやRevなどのリン酸化とその生理的意味をinvitroで解析した.その結果,CK-IIによってリン酸化されたRTとproteaseは,その酵素活性が有意に活性化されることが明らかになった.
3. 抗HIV-1作用を持つ天然化合物によるCK-II活性阻害
CK-IIによるRTとproteaseの活性化を選択的に阻害する天然抗HIV-1剤を検索した.
その結果,このCK-IIを介するRTの活性化は,quercetin,isoflavone誘導体,glycyrrhetinic酸誘導体(oGA)やNCS-chromophoreによって低濃度で阻害された.しかもこれらの濃度では,RT活性に何ら影響を与えなかった.この結果から,これらの天然化合物はCK-IIを選択的に阻害することによってHIV-1を阻害すると結論された.
4. 炎症性mediatorに対するGLの作用
GL-affinityカラムを用いた上述の方法で,炎症性関連因子(酵素類)を分離精製した.その結果,sPLA2,5'-lypoxygenase(5'-LOX)やcyclooxygenase(COX)などがgbpとして分離精製された.これらのgbPは HIV-1proteinと同様にCK-IIによりリン酸化されて,活性化された.さらに,CK-IIの選択的阻害剤(oGA,quercetinやNCS-chromophore)によって阻害された.従って,GLの抗炎症作用は,CK-IIを介するgbPの活性化を選択的阻害によると結論された.
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[Publications] Ohtsuki,K.et al.: "Biochemical characterization of HIV-1 Rev as a potent activator of casein kinase II in vitro" FEBS Lett.,. 428. 235-240 (1998)
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[Publications] Harada,S.et al.: "Biochemical characterization of recombinant HIV-1 reverse transcriptase (rRT)as a glycyrrhizin-binding protein and the CK-II-mediated stimulation of rRT actively potently inhibited by glycyrrhetinic acid derivative as an effective" Biol.Pharm.Bull.21・12. 1282-1285 (1998)
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[Publications] Ohtsuki,K.et al.: "Separation of phospholipase A2 in Habu snake venom by as glycyrrhizin (GL)-affinity column chromatography and identification of a GL-sennsitive enzyme" Biol.Pharm.Bull.21・6. 574-578 (1998)
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[Publications] Abe,Y.et al.: "Characterization of an Apoptosis-induced factor in Habu snake venom as a glycyrrhizin (GL)-binding protein potently inhibited by GL in vitro" Biol.Pharm.Bull.21・9. 924-927 (1998)
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[Publications] Tanoue,S.et al.: "Neocarzinostatin-chromophore : a potent inhibitor of casein kinase II in vitro" J.Antibiotics. 51. 95-97 (1998)
