C型肝炎ウイルス表面蛋白の抗原性の分析と特異的抗原を使った感染予防と治療への応用

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670465
• Research Institution: Nagoya Institute of Technology
• Principal Investigator: 中野 功 名古屋工業大学, 保健管理センター, 助教授 (30262942)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福田 吉秀 名古屋大学, 医学部, 講師 (40181284)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / DNAワクチン / コンフォメイショナルエピトープ / 抗E2抗体 / 免疫蛍光染色

Research Abstract

HCVワクチンの開発には、中和抗体の誘導が不可欠である。最近、コンフォメイショナルエピトープをもった抗E2抗体には、交叉反応性があり強いウイルス中和作用のある可能性が示唆され、ワクチンエピトープの候補として注目されている。HCVの表面蛋白における抗原性の高い領域を三次構造の面からスクリーニングするため、HCV患者血清中抗E2抗体のコンフォメイショナルエピトープの特徴を検討した。方法は、HCV-H(ゲノタイプ1a)E2領域の種々の欠損または変異体をサイトメガロウイルスプロモーターのもとに発現するプラスミドを構築し、メラノーマ細胞にトランスフェクトした。2日後細胞を固定し、HCV(ゲノタイプ1b)患者血清を使って免疫蛍光染色し、血清中抗E2抗体の発現蛋白に対する抗体反応を測定した。その結果、患者血清18例中抗E2抗体陽性は12例(67%)であった。抗体陽性12例中10例においてaa406-aa644、2例においてaa406-aa643が、強い抗体反応を維持する最小の領域であることが同定された。これより、コンフォメイショナルエピトープがこの範囲であることが示唆された。
糖鎖付着可能部位への変異導入の検討では、aa448、aa556、aa623の変異が抗体の反応に影響を与えた。特にaa448の変異は、抗体反応性を完全に消失させ、この部位の糖鎖が、抗体のエピトープ形成に強く関与していることが示された。以上のように今回、ゲノタイプ1aと1bに交叉反応性のある抗E2抗体のコンフォメイショナルエピトープの特徴を明らかにした。この結果は次年度に予定しているC型肝炎DNAワクチンの設計に重要なデータである。