肝細胞膜上に局在するトランスポーター分子の細胞内移送機構の解析-green fluorescent proteinとの融合蛋白発現系を用いたリアルタイム解析-

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670508
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 加川 建弘 東海大学, 医学部, 講師 (30245469)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 細井 克美 東海大学, 医学部, 助手 (50317814) ; 西崎 泰弘 東海大学, 医学部, 講師 (80237693) ; 渡辺 勲史 東海大学, 医学部, 助教授 (90167156)
• Keywords: p-glycoprotein / hepatocyte / multidrug resistance / green fluorescent protein / intracellular trafficking

Research Abstract

平成10年度はgreen fluorescent protein(GFP)の3'側にP-glycoprotein(multidrug resistance1,MDR1)を挿入したconstruct(GFP-hMDR1)を作製したが、control同様、細胞内にdiffuseに発現していた。そこで平成11年度はGFPの5'側にMDR1を挿入したconstruct(hMDR1-GFP)を作製した。hMDR-GFP融合蛋白はHeLa細胞のplasma membraneに局在し、共焦点レーザー顕微鏡のZ-seriesでもその局在が確認された。またphotobleaching後、1時間でplasma membraneの蛍光が復帰しておリ、融合蛋白が細胞内で合成され、plasma membraneにtargetingされていることが確認された。HepG2細胞でもplasma membraneへの局在が認められたが、遺伝子導入効率が極めて悪く(0.01%以下)、蛍光強度も低いため十分な観察には不適であった。transfectionを種々の条件で行ったが、遺伝子導入効率の改善は認められなかった。結論として、GFP-hMDR1と異なり、hMDR1-GFPはplasma membraneに局在し、その細胞内移送機序の解明に有用と考えれた。今後はvirusを介したtransfectionなど遺伝子導入法の改善に取り組む予定である。