1999 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト神経系培養細胞におけるサイトカインによるプレセニリン遺伝子発現制御の解析
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10670592
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| Research Institution | Saga Medical School |
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Principal Investigator |
佐藤 準一 佐賀医科大学, 医学部, 講師 (30274591)
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| Keywords | 培養ヒト神経細胞 / サイトカイン / グロースファクター / プレセニリン-1遺伝子 / プレセニリン-2遺伝子 |
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| Research Abstract |
[目的]家族性Alzheimer病(AD)ではpresenilin-1(PS1),presenilin-2(PS2)遺伝子点変異の存在が報告されている。本研究では「孤発性ADにおいても、変性神経細胞・活性化グリア細胞の産生するグロースファクター・サイトカインが神経細胞におけるPS1,PS2遺伝子の発現異常を誘導することによって神経細胞死を促進している」との仮説を考案しヒト神経系培養細胞で検討した。[方法]SK-N-SH neuroblastoma,IMR-32 neuroblastoma,differentiated neurons derived from NTera2 teratocarcinoma induced by treatment with retinoic acid(NTera2-N),U-373MG astrocytomaを、完全無血清培地にrecombinant human TNF-α,IL-1β,IFN-γ,IL-10,TGF-β1(100ng/ml each),1mMldibutyryl cyclic AMP(dbcAMP),or 100nM phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)を添加し48時間培養後に全RNAを抽出・泳動分離し、digoxigeninラベルPS1,PS2遺伝子特異的probeを用いてNorthern blot解析を行った。[結果]全細胞株でサイトカイン未処理条件下でPS1mRNA(3.0kb),PS2mRNA(2.3kb)の構成的発現を認めた。全細胞株で上記のどのグロースファクター・サイトカイン刺激でもPS1mRNA発現量は変動しなかった。PS2mRNA発現量は、SK-N-SHではTNF-α刺激後にコントロールの1.9倍に増加した。NTera2-NではPMA,IL-1β,TGF-β1刺激後にコントロールの0.18,0.47.0.48倍に減少した。U-373MGではIFN-γ刺激後にコントロールの1.9倍に増加し、PMA,IL-1β刺激ではコントロールの0.36,0.45倍に減少した.IMR-32では上記のどのグロースファクター・サイトカイン刺激でもPS2mRNA発現量は変動しなかった。[結論]本研究ではヒト神経系培養細胞でPS1mRNA,PS2mRNAの構成的発現を認めること、PS1mRNA発現はグロースファクター・サイトカインによる転写制御を受けないこと、PS2mRNA発現は細胞特異的にグロースファクター・サイトカインによる影響を受けることを証明した。
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[Publications] Satoh J et al.: "Constitutive and cytokine-inducible expression of prion protein gene in human neural cell lines"Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 57. 131-139 (1998)
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[Publications] Satoh J et al.: "Cultured skin fibroblasts isolated from mice devoid of the prion protein gene express major heat shock proteins in response to heat stress"Experimental Neurology. 151. 105-115 (1998)
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[Publications] Satoh J et al.: "Constitutive and heat-inducible expression of HSP105 in neurons and glial cells in culture"Neuroreport. 9. 2977-2983 (1998)
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[Publications] Satoh J et al.: "The 14-3-3 protein detectable in the cerebrospinal fluid of patients with prion-unrelated neurological diseases is expressed constitutively in neurons and glial cells in culture"European Neurology. 41. 216-225 (1999)
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[Publications] Satoh J,Kuroda Y: "Constitutive and cytokine-regulated expression of presenilin-1 and presenilin-2 genes in human neural cell lines"Neuropathology and Applied Neurobiology. 25. 492-503 (1999)
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[Publications] Satoh J,Kuroda Y: "Differential gene expression between human neurons and neuronal progenitor cells in culture: an analysis of arrayed cDNA clones in NTera2 human embryonal carcinoma cell line as a model system"Journal of Neuroscience Methods. 94. 155-164 (2000)
