心血管におけるミオシンホスファターゼ調節サブユニットの遺伝子発現制御機構の解明

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670645
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 伊藤 正明 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00223181)
• Keywords: ミオシンホスファターゼ / MYPT1 / 転写活性調節領域

Research Abstract

(1)ヒトMYPT1のゲノム遺伝子のシークエンス解析
平成10年度のスクリーニングによって得られたMYPT1ゲノム遺伝子のシークエンス解析をおこない、508bpのエクソン1とさらにそれより5'側上流の約5kbpの全シークエンスを明らかにした。5'上流領域にはタンパク質結合部位と想定される種々のシスエレメントをみとめ、GC-richで、TATAbox、CCAATboxはなく、転写開始点(+1)上流-58〜-64bpの領域にGGGCGG配列(GCbox)を認め、ヒトMYPT1ゲノム遺伝子はハウスキーピング遺伝子と考えられた。
(2)ヒトMYPT1の転写活性調節機構の解析
前年度に得られたヒトMYPT1ゲノム遺伝子のうち、cap site hunting法にて決定した転写開始点を+1として、その上流領域-1967bpから下流領域+44までの5'上流領域について転写活性領域の検討をおこなった。転写活性領域を同定するためにホタルルシフェラーゼのpGL3レポーター遺伝子に5'端を種々の長さのMYPT1 5'上流領域PCR断片をクローニングし、それぞれのベクターをヒト培養血管平滑筋細胞にトランスフェクションし、そのルシフェラーゼ活性を測定した。その活性の値から、Sp-1結合配列を含む断片-81〜+44はCore promoter領域で、最大のプロモーター活性に必要な配列は-246〜-230までの間にあり約10倍の活性上昇が認められた。

Research Products

• [Publications] Yoshinori Suzuki: "Agonist-induced regulation of myosin phosphatase activity in human platelets through activation of Rho-kinase"Blood. 93. 3408-3417 (1999)
• [Publications] Mamoo Nakamura: "Effects of the phosphorylation of myosin phosphatase by cyclic GMP-dependent protein kinase"Cellular Signaling. 11. 671-676 (1999)
• [Publications] Yasuko Kureishi: "Regulation of Ca^<27>-independent smooth muscle contraction by alternative staurosporine-sensitive kinase"European Journal of Pharmacology. 376. 315-320 (1999)
• [Publications] Jianhua Feng: "Dephosphorylation of distinct sites on the 20kDa myosin light chain by smooth muscle myosin phosphatase"FEBS Letters. 448. 101-104 (1999)
• [Publications] Howard K.Surks: "Specific association of CGMP-dependent protein kinase with the myosin binding subunit of myosin phosphatase"Science. 286. 1583-1587 (1999)
• [Publications] Jianhua Feng: "Inhibitory phosphorylation site for Rho-associated kinase on smooth muscle phosphatase"Journal of Biological Chemistry. 274. 37385-27390 (1999)