学校心臓検診で診断されるQT延長児のイオンチャンネル異常のマススクリーニング

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670739
• Research Institution: Kagoshima University
• Principal Investigator: 野村 裕一 鹿児島大学, 医学部附属病院, 講師 (90237884)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西 順一郎 鹿児島大学, 医学部, 助手 (40295241) ; 河野 幸春 鹿児島大学, 医学部, 助手 (70291549) ; 吉永 正夫 鹿児島大学, 医学部, 助教授 (10145469)
• Keywords: QT延長 / Kチャンネル / Naチャンネル / CFLP

Research Abstract

QT延長児のイオンチャンネル遺伝子異常は先天性QT延長症候群と同様にヘテロの異常と考えられる.Cleavase fragment length polymorphism(CFLP)により実際にヘテロの遺伝子異常がスクリーニング可能かどうかQT延長症候群の家系で異常のスクリーニングを行った.
1. polymerase chainreaction(PCR)
イオンチャンネルのSCN5A,HERG,KVLQT1について検討を行った.SCN5Aについては現在まで異常の報告されたDIIIからDIVについてカバーするように2対のプライマーデザインを行った.HERGについてはほぼ全遺伝子をカバーする2対のプライマーデザインを行った.KVLQT1についてはほぼ全遺伝子をカバーする3対のプライマーデザインを行った.いずれにおいても良好な遺伝子増幅が行えた.
2. Cleavase fragment length polymorphism(CFLP)
増幅された遺伝子のPCR産物を精製し,熱変性させ1本鎖DNAとし,自己Hybridizeさせた後Cleavaseを用いて自己Hybridize構造部分を特異的に切断させた.処理後のPCR産物をポリアクリルアミドゲルで電気泳動後イモビロンSメンブレンへトランスファーし,ケミルミネッセンス反応によりバンドを可視化させ,泳動パターンをQT延長症候群の母子と正常人のものと比較した.
SCN5Aの2種類のPCR産物,HERGの2種類のPCR産物には差を認めなかった.KVLQT1はS2-S4,S6には差を認めなかったが,S5-porcのPCR産物に差を認めており,この部位の遺伝子異常が示唆された.
3. 遺伝子異常の解析
S5-poreのPCR産物について現在ダイレクトシークエンスにより遺伝子解析を行っている.