1999 Fiscal Year Annual Research Report
血友病A遺伝子治療における第VIII因子発現と免疫学的影響に関する研究
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10670751
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
嶋 緑倫 奈良県立医科大学, 医学部, 助教授 (30162663)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 一郎 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (00201616)
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| Keywords | 血友病A / 第VIII因子 / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
Adenovirus expression vector kit(Takara)を使用して、プロトコールにそってCOS-TPC法により、E1およびE3遺伝子が欠損した非増殖型組換えアデノウィルスを作製した。組換えアデノウィルスは、Cytomegarovirus enhancer/chicken β-actin promoter/rabbit β-globin 3'UTR制御下に、Bドメインを除去したイヌ第VIII因子遺伝子とrabbit β-globin polyAにより構成されている。この組換えアデノウィルスを種々の哺乳動物培養細胞(COS1、HepG2、HeLa)に感染させ、1・4・7日後培養細胞上清中に含まれるイヌ第VIII因子活性を、ヒト第VIII因子欠乏血漿を基質とした凝固一段法および合成発色基質法により測定した。合成発色基質法は活性型第X因子の基質であるS2222、純化活性型第IX因子、フォスファチジルセリン/フォスファチジルコリン混合物、塩化カルシウムを用いて行った。COS1細胞では4日後約0.6単位/ml、7日後1.0単位/ml以上、HepG2細胞でも4日後約0.8単位/ml、7日後1.0単位/ml以上の凝固活性を検出したが、HeLa細胞では4日後・7日後とも0.1単位/ml未満の凝固活性のみしか検出できなかった。凝固1段法と合成発色基質法では大差はなかった。イヌ第VIII因子の比活性はヒト第VIII因子に比して数倍高いと考えられるため、現在イヌ第VIII因子に交差反応性を示す抗ヒト第VIII因子モノクローナル抗体を用いて、組換えアデノウィルスより発現したイヌ第VIII因子抗原をELISA法にて測定中である。
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[Publications] I.Kuwahara,H.Maruyama,M.Shima et al: "Mapping of the minimal domain encoding a conformational epitope by λ phage surface display: factor VIII inhibitor antibodies from haemophilia A patients"Journal of Immunological Method. 224. 89-99 (1999)
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[Publications] H.Matsui,M.Sugimoto,M.Shima et al: "Transient hypoplastic anemia caused by primary human parvouirus B19 infection in a previously untreated patient with hemophilia transfused with a plasma-derived,monocional antibody-purified factor VIII concentrate"Journal of Pediatric Hematology/Oncology. 21. 74-76 (1999)
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[Publications] H.Ohta,I.Takahashi,M.Shima et al: "Histocompatibility antigens and alleles in Japanese haemophilia A with or without factor VIII antibodies"Tissue Antigens. 54. 91-97 (1999)
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[Publications] EL.Saenko,A.Saratanov,M.Shima et al: "Use of surface plasmon resonance for studies of protein-protein and protein-phosphollpid membrane interactions Application to the binding of factor VIII to von Willebrand factor and to phosphatidyiserine-containing membranes"Journal of Chromatography A. 852. 59-71 (1999)
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[Publications] K.Nogami,M.Shima,K.Hosokawa et al: "Role of factor VIII C2 domain in factor VIII binding to factor Xa"Journal of Biological Chemistry. 274. 31000-31007 (1999)
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[Publications] K.Nogami,M.Shima,M.Naka,et al: "Identification of a factor VIII peptide,residues 2315-2330,which neutralises human factor VIII C2 inhibitor alloantibodies: requirement of Cys2326 and Glu2327 for maximum effect"British Journal of Haematology. 107. 196-203 (1999)
