2000 Fiscal Year Annual Research Report
血友病A遺伝子治療における第VIII因子発現と免疫学的影響に関する研究
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10670751
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
嶋 緑倫 奈良県立医科大学, 医学部, 助教授 (30162663)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中 宏之 奈良県立医科大学, 医学部, 助手 (40281761)
田中 一郎 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (00201616)
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| Keywords | 血友病A / 第VIII因子 / 遺伝子治療 / C2ドメイン / 抗第VIII因子同種抗体 |
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| Research Abstract |
Adenovirus expression vector kit(Takara)を使用して、プロトコールにそってCOS-TPC法により、E1およびE3遺伝子が欠損した非増殖型組換えアデノウィルスを作製した。組換えアデノウィルスは、Cytomegarovirus enhancer/chicken β-actin promoter/rabbit β-globin 3'UTR制御下に、イヌおよびヒト第VIII因子遺伝子あるいは第VIII因子各ドメイン遺伝子とrabbit β-globin polyAにより構成されている。この組換えアデノウィルスをCOS1細胞に感染させた。COS細胞で発現された第VIII因子の発現実験を行った。発現された遺伝子組換え型第VIII因子およびC2ドメインと血友病Aイヌモデルや重症血友病A患者に出現した抗第VIII因子同種抗体との反応性を検索し、必須抗原エピトープの解析を行い、C2ドメインC末領域内アミノ酸残基に必須エピトープの同定に成功した。さらに抗C2ドメイン同種抗体が活性型第X因子の結合および第VIII因子に対する開裂/活性化作用を抑制すること、C2ドメインが活性型第X因子に結合することなどより、活性型第X因子の結合部位が第VIII因子C2ドメイン内に存在することを証明した。また、抗C2抗体がトロンビンの開裂および結合を抑制し、さらに、C2ドメインがトロンビンに結合したことからC2ドメインにはトロンビン結合部位も存在することを明らかにした。以上の研究により、第VIII因子のC2ドメインは抗第VIII因子同種抗体のエピトープとして、また、第VIII因子の機能発現部位としてきわめて重要であることが判明した。これらの研究成果は血友病A遺伝子治療において発生しうる抗第VIII因子同種抗体の免疫生化学的解明に大きく寄与するものである。
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[Publications] Keiji Nogami,Midori Shima,Akira Yoshioka et al.: "Demonstration of circulating factor VIII Immune complexes in patients with type 2 acquired Hemophilia A and protection from activated protein C-mediated proteolysis."Blood. 97. 669-677 (2001)
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[Publications] Keiji Nogami,Midori Shima,Akira Yoshioka et al.: "The Factor VIII C2 domain contains the thrombin binding site responsible for thrombin-catalyzed cleavage at Arg1689."Journal of Biological Chemistry. 275. 25774-25780 (2000)
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[Publications] Masaru Shibata,Midori Shima,Akira Yoshioka et al.: "An Alloantibody Recognizing The FVIII A1 Domain in A Patient with CRM reduced Hemophilia A in Whom The Corresponding DNA Sequence Is Deleted ; Agreement of Inhibitor Epitope with Gene Mutation."Thrombosis and Haemostasis. 84. 442-448 (2000)
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[Publications] Akira Shirahata,Midori Shima,Akira Yoshioka et al.: "Pharmacokinetics, prophylactoic effects, and safety of a new recombinant FVIII formulated with sucrose (BAY 14-2222) in japanese patients with hemophilia A."International Journal of Hematology. 72. 101-107 (2000)
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[Publications] 嶋緑倫,吉岡章.: "Annual Review血液血友病インヒビター症例の治療-最近の考え方"中外医学社. 6 (2000)
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[Publications] 嶋緑倫: "臨床薬物治療学-疾病の解説と薬の使い方血友病"アークメディア社. 12 (2000)
