2000 Fiscal Year Annual Research Report
NF1プロモーター・シスエレメントの解析に関する研究
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10670808
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| Research Institution | JIKEI UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE |
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Principal Investigator |
太田 有史 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (20168933)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小松崎 眞 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (30266621)
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| Keywords | 神経線維腫症1 / NF1 / プロモーター / Ras |
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| Research Abstract |
前々年度COS7細胞にたいしてNF1(Neurofibromatosis 1)promoter deletion mutantsをH-Ras(V12)とともにco-transfectionしたところ、すべてのconstructsでほぼ7から9倍の上昇を認めた。すなわちCOS7細胞では、このpromoter領域にはRas-responsible elementが存在しない可能性が高いことがわかった。これは、細胞内でRas-GTPレベルの上昇が十分でないとも考えられた。そこで、Ras-GTPレベルがすでに高いことが予想される細胞か、Ras-GTPレベルがRasのtransfectionにより高く誘導される細胞をもちいて実験をおこなうことにした。今回は、H9c2ラット心筋細胞に対して、心筋内のみでしか活性化しないRas-constructをもちいた。この系を使用することにより細胞内Ras-GTPレベルが高く誘導されることが予想された。まず、この系をもちいて最長のNF1 promoter deletion mutantである約4.3kbのSAC construct(-4368 to +474)にたいしてoptimizationをおこなった。その結果、control vectorにたいして約25倍という最高値をとった。さらに、心筋内のみでしか活性化しないRas-constructをco-transfectionしたところ、さらに1.5倍の上昇がみられた。次に、このoptimizationの条件で、すべてのNF1 promoter deletion mutantsをRas-constructとともにco-transfectionしたところ約600bpの6E construct(-143 to +474)で4.5倍という最高値をとった。
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