アトピー性皮膚炎における抗原特異的T細胞クロノタイプの解析と治療への応用

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670810
• Research Institution: St. Marianna University School of Medicine
• Principal Investigator: 溝口 昌子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (30010250)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西岡 久寿樹 聖マリアンナ医科大学, 難病治療研究センター, 教授 (60049070) ; 河 陽子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (10082273) ; 高濱 英人 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (90267633)
• Keywords: アトピー性皮膚炎 / T細胞クロナリティー / T細胞レセプター / RT-PCR / SSCP / ダニ抗原

Research Abstract

(目的)アトピー性皮膚炎(AD)の皮疹の組織学的特徴はT細胞を主体とする単核球浸潤であるが、この浸潤T細胞が抗原特異的反応を示しているかは充分検討されていない。そこで本研究では、AD病変部のT細胞浸潤が抗原特異的反応であることを証明し治療へ応用することを目的とした。T細胞は抗原提示細胞上に提示されたMHC抗原ペプチド複合体をT細胞レセプター(以下TCR)を介して認識し、T細胞内に増殖シグナルが伝達され、抗原を特異的に認識するTCRを有するT細胞クローンが増殖する。このTCRに注目し、今回の研究を行った。
(方法と結果)典型的な重症AD患者7例と健常人5例から皮膚を採取し、クロノタイプを検出するシステム、reverse transcript polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphysm(RT/PCR-SSCP)を用い検討した。TCRのCDR3が同一のクロノクイブであるT細胞が、異なる2箇所のAD皮膚病変部に存在し、オリゴクローナルな集積が示された。RASTでDp値の高い6例のAD患者より末梢単核球分画(以下PBMC)を粗ダニ抗原(以下Dp)とIL-2で2週間混合培養し、RT/PCR-SSCPを行うとPMBCは特異的クローンが集積していない状態からオリゴクローナルな集積を示した。このDp刺激PBMCより誘導されるT細胞クローンは、AD患者皮膚病変部に認めたTCRのCDR3と同一のクロノタイプであり、さらにこのTCRのCDR3のシークエンス分析で、4例中2例でアミノ酸配列が一致した。
(結論)以上の結果は、AD患者皮膚病変部では侵入した抗原と特異的に反応するT細胞の浸潤があり、AD病変の形成に深く関与している可能性を示唆している。また、その病因としてのDpの関与が示された。対応するDpの抗原構造を変換させた蛋白を合成し細胞機能をブロックすることによりAD治療を行うことができるか現在in vitroで検討中である。

Research Products

• [Publications] Takahama H, et al(Mizoguchi H): "Accumulation of T. cell clonotypes in the skin lesions of patients with psoriasis vulgaris"J. Invest Dermatol. 114(in press). (2000)
• [Publications] Kurakawa H, et al.(Nishioka K): "Characterisation of T cell clonotypes that accumulated in multiple joints of patients with rheumatoid arthritis"Annals of the Rheumatic Diseases. 58・9. 546-553 (1999)
• [Publications] Hayashi K, et al.(Nishioka K): "Clonal expansion of T cells that are specific for autologous ovarian tumor among tumor-infiltrating T cells in humans"Gynecologic Oncology. 74・1. 86-92 (1999)
• [Publications] Tanaka A, et al.(Nishioka K, Mizoguchi M): "Clonotypic analysis of T cell infiltrating the skin of patients with atopic dermatitis: Evidence of antigen-driven accumulation o T cells"Human Immunol. 48. 107-113 (1996)