Ara-Cの白血病細胞内活性化物高感度モニターによる抗がん効果の予測

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670938
• Research Institution: Fukui Medical University
• Principal Investigator: 上田 孝典 福井医科大学, 医学部, 教授 (40160171)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山内 高弘 福井医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (90291377)
• Keywords: ara-C / ara-CTP / TDM / 急性白血病 / tailor made

Research Abstract

細胞内ara-CTPを基質としてポリメラーゼによりDNA内に転入されたara-C量はara-Cの抗腫瘍効果の要と考えられている。我々はこのDNA内転入ara-Cの分子遺伝学的定量法の確立を試みた。
ara-Cを添加処理した培養白血病細胞(HL-60)から酸不溶性分画を採取した。水酸化カリウム,PCA,塩酸処理によりRNAを可溶化除去した。沈殿物を強酸加熱しDNAを溶解抽出した。得られたDNAにデオキシリボヌクレアーゼ、フォスフォジエステラーゼ、アルカリフォスファターゼ、を加え酵素学的にヌクレオシドへ分解した。高速液体クロマトグラフィ法により陽イオン交換カラムに吸着させ蟻酸アンモニウムによりara-C分画を他のヌクレオシドから溶出分離した。同分画を凍結乾燥により濃縮し回収されたara-CをRIA法により抗ara-C抗体を用いて測定した。
放射性同位元素標識DNAを用いた白血病細胞からのDNA抽出回収率は92%であった。放射性同位元素標識チミジン添加培養後の白血病細胞からのDNA抽出回収率91%で、放射性同位元素標識ウリジン添加培養後の白血病細胞からのRNA抽出回収率90%であった。これらより細胞からDNAの回収は良好と判断された。放射性同位元素標識ara-C添加培養後の白血病細胞において、DNA内に転入されたara-Cヌクレオチドの90%が酵素学的分解によりara-Cとして回収された。高速液体クロマトグラフィーによるara-Cの分取凍結乾燥の過程での回収率は99%であった。以上よりDNA抽出以降の過程においても回収率は良好と判断された。現在、分取凍結乾燥後のara-Cをラジオイムノアッセイで測定し本法の定量性を確認している。我々は本法を臨床検体に応用し抗腫瘍効果と比較検討する、新しい核酸レヴェルでのモニタリングを行ない白血病治療の個別化(tailor made)についての検討を今後更に進展させる予定である。

Research Products

• [Publications] Haruyuki Takemura: "Simultaneous Treatment with 1-β-D-Arabinofuranosylcytosine and Daunorubicin Induces Cross-Resistance to Both Drugs due to a Combination-specific Mechanism in HL60 Cells"Cancer Res.. 61. 172-177 (2001)
• [Publications] Takahiro Yamauchi: "Monitoring of intracellular 1-β-D-Arabinofuranosylcytosine 5'-triphosphate in 1-β-D-arabinofuranosylcytosine therapy at low- and conventional- doses"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 546-553 (2001)
• [Publications] Takahiro Yamauchi: "Close correlation of 1-β-D-Arabinofuranosylcytosine 5'-triphosphate, an intercellular active metabolite, to the therapeutic efficacy of N^4-behenoyl-1-β-D-arabinofuranosylcytosine therapy for acute myelogenous leukemia"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 975 (2001)
• [Publications] Toshihiro Fukushima: "A pharmacokinetic study of idarubicin in Japanese patients with malignant lymphoma : relationship with leukocytopenia and neutropenia"Int. J. Hematol.. 74. 297-302 (2001)
• [Publications] Adel Badran Abdul Kader: "Time sequential expression of markers of apoptosis induced by 1-β-D-Arabinofuranosylcytosine in human T-lymphoblastic leukemia CCRF-CEM cells"Anticancer Res.. 21. 1987-1995 (2001)
• [Publications] 山内高弘: "Ara-C における Cellular TDM の臨床応用"臨床医薬. 17. 1129-1134 (2001)
• [Publications] 上田孝典: "白血病と Ara-C 大量療法"大野竜三編、南江堂. 8 (2001)