白血病細胞における癌抑制遺伝子p53蛋白燐酸化とアポトーシス関連遺伝子発現調節

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670944
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 小林 透 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (00144246)
• Keywords: p53 / 燐酸化 / Bax / Bcl-2 / Fas / APO-1 / アポトーシス / 放射線照射 / cytosine arabinoside

Research Abstract

白血病細胞株BV173は野性型p53を有し、放射線照射とcytosine arabinoside処理で、共にBax遺伝子発現は誘導されるが、Fas/APO-1はcytosine arabinoside処理ではほとんど誘導されなかった。Fas/APO-1の誘導の相違について、放射線照射とcytosine arabinoside処理でp53の性状に相違がないかどうかを等電点電気泳動とSDS-PAGEの2次元電気泳動で検索したところ、p53の等電点が異なり、phosphatase処理で共通の等電点にもどるためp53の燐酸化に相違があることが示された。p53燐酸化を抗体を用いて、さらに検索を進めている。また、アポトーシスに陥っているBV173細胞においてはBax蛋白ではp21に加えてp19、p21/WAF1/Cip1蛋白ではp21に加えてp14にcleavageを来した蛋白が出現することが示された。
K562細胞にp53下流遺伝子であるBax,Bcl-2発現ベクター,またはコントロールベクターをelectroporationにて一過性に遺伝子導入し、annexin V-FITCで細胞膜の外側に露出したphosphatydilserineを検出する方法でアポトーシスを検索すると、Bax遺伝子を導入したときが最もannexin-V陽性細胞が多い。しかし、electroporation自体が細胞障害性を有するためreverse tetracycline systemを用いたBax発現系をK562細胞に導入しBaxの強発現のみでアポトーシスが誘導されるかどうかをTUNEL法で検索したところ、TUNEL陽性細胞が出現しcaspase 3の活性化も認めた。Jurkat細胞では同様の方法でアポトーシスが誘導されることが証明されているが、Jurkat細胞はBax遺伝子のmutationがあり、野性型Bax遺伝子を有する細胞でも、Bax過剰発現がアポトーシスを誘導することが本研究で証明された。

Research Products

• [Publications] Tohru Kobayashi: "Differential p53 phosphorylation and activation of apoptosis-promoting genes Bax and Fas/APO-1 by radiation and ara-Ctreatment." Cell Death and Differentiation. 5. 584-591 (1998)
• [Publications] Tohru Kobayashi: "Overexpression of Bax gene sensitizes K562 erythroleukemia cells to apoptosis induced by selective chemotherapeutic agents." Oncogene. 16. 1587-1591 (1998)