白血病細胞におけるSTAT転写因子を介するIL-1のオートクライン産生機構の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10670976
• Research Institution: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• Principal Investigator: 塚田 順一 産業医科大学, 医学部, 助手 (20227367)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 三砂 將裕 産業医科大学, 産業保健学部, 助教授 (30157474) ; 江藤 澄哉 産業医科大学, 医学部, 教授 (90010347)
• Keywords: インターロイキン / STAT / 白血病

Research Abstract

「目的」;近年、サイトカインによる細胞内シグナル伝達経路として、STAT (signal transducersand activators of transcription)転写因子が注目されている。サイトカインのレセプターへの結合は細胞質のSTAT転写因子をチロシンリン酸化し、リン酸化されたSTATは、核内に移行し、GASシークエンス{TT(C/A)CNNNAA}に結合する。
申請者は、IL-1刺激によりSTAT1のN末端に対する抗体にて認識される分子量52KDのSTAT様転写因子(本計画書において、STAT/IL-1因子と呼ぶ。)がチロシンリン酸化されることを見出した。この因子は、ヒトIL-1β遺伝子を誘導する転写因子であり、従来のGASと8番目の塩基にmismatchを有するTTCCTGAGAというヒトIL-1β遺伝子エンハンサー内のGAS類似シークエンス(GAS/IL-1)を特異的に認識する。今回我々は、このSTAT/IL-1因子の性状を明らかにして、IL-1のよる白血病細胞のオートクライン増殖機構を解明したい。
「方法」;今年度、申請者は、ゲルシフトアッセイを用いて白血病細胞においてSTAT/IL-1因子が、恒常的に活性化されているかを検討した。ゲルシフトアッセイは、ヒトIL-1β遺伝子エンハンサーGASシークエンス(GAS/IL-1)を放射線標識したものをプローブとした。さらに我々は多くの患者白血病細胞を単離し、細胞核抽出液を作成した。これら白血病細胞核抽出液を放射線ラベルGAS/IL-1DNAフラグメントと混合し、放射線ラベルGAS/IL-1に結合する蛋白を解析した。
「結果」;この結果、活性化STAT/IL-1のGAS/IL-1への結合が観察され、白血病細胞においては、STAT/IL-1因子が恒常的に活性化されていることが考えられた。今後、ウエスタンプロットにてチロシンリン酸化されたSTAT/IL-1因子が白血病細胞核抽出液に存在するかを検討するとともに、STAT/IL-1因子のクローニングを行う。さらに、ヒトIL-1β遺伝子エンハンサーGASシークエンス(GAS/IL-1)が白血病細胞において恒常的に誘導されているかをGAS/IL-1シークエンスを有するCATベクターを白血病細胞に導入する事により検討する。