血管吻合部狭窄予防を目的とした遺伝子治療の基礎研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10671101
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 大城 秀巳 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (80272558)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 濱田 洋文 癌研究会, 化学療法センター・分子生物治療研究部, 部長(研究職) ; 宮田 哲郎 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (70190791) ; 重松 宏 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (40134556) ; 細井 温 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40311625) ; 小山 博之 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (10241994)
• Keywords: アデノウイルス / 遺伝子治療 / ラット頚動脈バルーン障害 / 内膜肥厚 / サイクリンD / Rb蛋白 / p27

Research Abstract

本研究は血管吻合部狭窄に対する遺伝子治療の開発のため1.肥厚内膜への遺伝子導入法の確立と2.遺伝子治療のターゲットとして細胞周期調節蛋白の内膜肥厚発生における関与を解明することを目的としている。内膜肥厚巣への遺伝子導入法に関しては、ラット頚動脈の肥厚内膜にアデノウイルスベクターを用いてLacZ遺伝子を導入したところ、高い効率での遺伝子導入が可能なことが明らかになった。この遺伝子導入法を用いて研究分担者の宮田、濱田は血小板由来成長因子レセプターのミュータントをラット頚動脈内膜肥厚巣に遺伝子導入することにより肥厚内膜の発生が有意に抑制される事を示し既に発表した。一方、細胞周期調節タンパクの研究では、転写因子E2Fの放出において重要と考えられるRb蛋白のリン酸化とその調節に関してラット頚動脈バルーン障害モデルを用いて検討した。頚動脈のバルーン障害後、経時的に頚動脈サンプルを採取しウエスタンブロット法でRb蛋白の発現を調べたところ、障害後1日目よりリン酸化を示すRb蛋白のバンドシフトを認めた。このバンドシフトは障害後2日目がピークであり、バルーン障害後の動脈壁平滑筋細胞の増殖ピークと一致した。次にRbのリン酸化に密接に関与するサイクリンDの発現について検討した。サイクリンDも障害後1日目には有意に発現が増加していたがRbのようなピークを作ることなく14日目まで漸増していた。このRbリン酸化とサイクリンDの発現パターンの違いは細胞周期インヒビターの重要性を示唆するが、我々は特にp27が重要な役割を果たしていると考えている。p27はバルーン障害直後よりその発現が低下し障害後7日より再度発現が強くなるため、特に7日目以降におけるサイクリンDの作用をうち消している可能性がある。これら動脈障害後の細胞周期調節蛋白の知見は研究分担者の小山が発表した。

Research Products

• [Publications] J. Deguchi: "Targeting endogenous platelet-derived growth factorB-chain by adenovirus-mediated gene transfer potently inhibits・・・・・"Gene therapy. 6. 956-965 (1999)
• [Publications] 出口 順夫: "バルーン障害後再狭窄に対するPDGF-Bを標的とした治療の可能性"脈管学. 38. 813-816 (1998)
• [Publications] H. Koyama: "Cell signaling in injured rat arteries"Thrombosis and Haemostasis. 82. 806-809 (1999)