内耳障害におけるグルタメート-Ca-一酸化窒素(NO)仮説の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10671607
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 山根 英雄 大阪市立大学, 医学部, 助教授 (60145787)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 久保 武志 大阪市立大学, 医学部, 助手 (60271194) ; 井口 広義 大阪市立大学, 医学部, 助手 (70271195)
• Keywords: 一酸化窒素 / グルタメート / 蝸牛 / フリーラジカル / 細胞死

Research Abstract

一酸化窒素(NO)の内耳に与える影響をin vivoおよびin vitroで検討した。
NO供与体であるNOC-5をモルモットの内耳正円窓に留置し、時間経過(12、28、72時間後)による内耳蝸牛有毛細胞の影響を検討したところ、12時間目では無変化であったが、28時間目の群において外有毛細胞のアポトーシスが散在性に観察された。培養系によるNOのin vitro実験では濃度依存性に内・外有毛細胞にネクローシスの様相が観察された。NOは蝸牛有毛細胞にその濃度、暴露時間の差により、ネクローシスおよびアポトーシスの両変化を与えることが判明した。
モルモットの内耳正円窓にグルタメートを留置し、12-72時間の時間経過による蝸牛有毛細胞の変化を検討したところ、時間経過と共に外有毛細胞の細胞死が認められ、72時間後では100%の細胞死が確認された。細胞死の数は時間依存性に増えていることか確認され、その細胞死はネクローシスの様相を呈した。この外有毛細胞死が何によるかを検討するために、シスチンの関与を検討した。グルタメートの培養条件下でシスチンの存在の有無による外有細胞の変化を検討したところ、シスチンの濃度依存性に外有毛細胞死が減少した。グルタメート暴露による細胞死は一様でないと考えるが、シスチンの存在下で、細胞死が抑制されたことは、細胞死にフリーラジカルの関与があることが〓〓〓〓〓示唆された。
今回の検討で、NOが蝸牛毒性を有し、感覚細胞にネクローシス、およびアポトーシスの両変化を与えることが判明した。グルタメートにも蝸牛外有毛細胞にネクローシスを与えることが判明したが、これらの因子と細胞死が臨床上、どのように結びつくかが次年度の検討課題である。

Research Products

• [Publications] Yamane H: "Assessment of hair cell death Using dye extrusion method" Acta Otolaryngol. Suppl 538. 7-11 (1998)
• [Publications] Takayama M: "Cleavage product from NO donor NOC-5 and inner ear hair cell damage" Acta Otolaryngol. Suppl 538. 12-18 (1998)
• [Publications] Sumami K: "Role of amino acids in cochlear degeneration:Deprivation of cystine induces death of cochlear hair cells of guinea pig inritr" Acta Otolaryngol. Suppl 538. 19-21 (1998)
• [Publications] Sunami K: "Role of amino acids in cochlear degeleration:Morphological changes in cochnear hair cells following glutamate application" Acta Otolaryngol. Suppl 538. 22-25 (1998)
• [Publications] Shibata S: "Induction of macrophage excedation in the inner ear by OK432 treatment" Acta Otolaryngol. Suppl 538. 26-31 (1998)
• [Publications] 山根 英雄: "グルタメート,一酸化窒素(NO)と蝸牛有毛細胞" The cell. 10. 7-10 (1998)