1998 Fiscal Year Annual Research Report
口腔内グラム陽性菌が産生するグルタミン酸特異的プロテアーゼの生理的機能の解析
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10671709
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| Research Institution | Iwate Medical University |
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Principal Investigator |
根本 優子 岩手医科大学, 歯学部, 講師 (10164667)
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| Keywords | 口腔細菌 / グルタミン酸特異的プロテアーゼ / クローニング |
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| Research Abstract |
Staphylococcus epidermidisが産生するプロテアーゼを精製し,その生化学的性状の検討,および同遺伝子のクローニングを行った.透析膜上培養後,菌体外生成物画分からイオン交換,およびゲルろ過クロマトグラフィーによりプロテアーゼを精製した.本プロテアーゼは透析膜上培養で得られる菌体外タンパク質の約50%に相当し,その分子量はSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で27kDaであった.N末端アミノ酸解析より26残基が明らかになり,成熟型Staphylococcus aureus V8プロテアーゼのN末端配列との相同性が認められた.本酵素活性の至適pHは約8.0で,グルタミン酸のカルボキシル基側の結合を特異的に加水分解し,アスパラギン酸の同基側も若干分解した.酵素活性はdiisopropyl fluorophosphateで阻害され,また,iodoacetic acidで部分的に抑制されたことから,本酵素はセリンプロテアーゼであると判定した.N末端配列をもとにして,S.epidermidis ATCC 14990株ゲノムDNAよりPCRダイレクトシークエンス,およびインバースPCRによりCDS 849bpを含む,1213bpのDNA配列をクローニングした.プロ酵素の推定分子量は30,783で,66残基のシグナル配列を有し,成熟酵素の推定分子量は23,554であった.V8プロテアーゼとDNA配列で57.6%,アミノ酸配列で31.7%の相同性が認められた.以上の結果より本酵素遺伝子は新規のS.epidermidisグルタミン酸特異的プロテアーゼをコードし,本菌の増殖や生体への定着に関与する可能性が示唆された.
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