1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10672019
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
勝 孝 岡山大学, 薬学部, 助教授 (40112156)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
永松 朝文 岡山大学, 薬学部, 助教授 (40155966)
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| Keywords | イオン選択性電極 / ポテンシオメトリー / 分子認識化学 / メチルアンモニウム / 細胞内外pH差(△pH)測定 / 補酵素NAD(P)H / 亜硝酸イオン / 酵素的サイクリング |
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| Research Abstract |
今年度は、有機アンモニウム電極の開発と応用研究を中心に進めた。特に、メチルアンモニウム電極の開発に成功したことから、この電極を用いた細胞内外pH差(ΔpH)の測定を試みた。メチルアミンはΔpHを測定するために渕用されるプローブの一つであり、細胞外pHが細胞内pHよりも高い条件下では、細胞外に添加したメチルアミンは細胞内に取り込まれるため、細胞内外のメチルアンモニウム濃度比を測定することによりΔpHを見積もることができる。この濃度比は、これまで放射性のメチルアミンを用いて測定されてきたが、私達は今回、電極法を用いるΔpH測定法を開発した。本法は、ΔpH変化に伴って引き起こされる細胞内へのメチルアンモニウムの取り込み量を細胞外液のメチルアンモニウムの濃度変化から定量する方法である。電極法は、細胞外液中の濃度だけを定量できるため、細胞分離を必要としない簡便なΔpH評価法となった一方イオン電極法がもつ簡便性を多くの生理活性物質の定量に展開させるために、硝酸還元酵素と亜硝酸イオン電極とを組み合わせて、補酵素NAD(P)Hの定量を試みた。硝酸還元酵素は硝酸イオンを補酵素により亜硝酸イオンに還元する。したがって、この酵素反応を利用して、生成した亜硝酸イオンを電極法により定量することは、補酵素を定量することに対応した。本法は補酵素を定量するための新しい方法となり、また2種類の酵素反応を組み合わせた「酵素的サイクリング」の手法に展開させることもできた。例えば、グルコース脱水素酵素と組み合わせて血清グルコースをイオン電極法により定量することも可能となった。
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[Publications] Takashi Katsu: "Determination of the pH differnce across a cell membrane using a methylammonium selective membrane electrode" Analyst. 123. 1369-1372 (1998)
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[Publications] Takashi Katsu: "Organoselenide as a novel ionophore for a silver-selective membrane electrode" Analytical Letters. 31. 1979-1989 (1998)
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[Publications] Takashi Katsu: "Potentiometric determination of NAD(P)H coenzymes using a nitrite-selective membrane electrode and a nitrate reductase enzyme and the application to glucose assay in human serum" Analytical Sciences. 15. 135-139 (1998)
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[Publications] Takashi Katsu: "Triphenyllead chloride as a new ionophore for an iodide-selective membrane electrode" Analytical Letters. 32 in press. (1999)
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[Publications] Takashi Katsu: "Mexiletine-sensitive membrane electrode for medical application" Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 19. 585-593 (1999)
