λfooファージを用いたサイボーグレクチンの作成と糖鎖認識の構造論的解

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10672038
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 山本 一夫 東京大学, 大学院薬学系研究科, 助教授 (20174782)
• Keywords: レクチン / ファージディスプレイシステム / λfooファージ / T7ファージ

Research Abstract

ガラクトース結合性のBPAレクチンを用い、糖結合部位に相当するループをコードするcDNA中にランダムな変異を導入したレクチンライブラリーを作成した。さらに、この改変cDNAをλ fooファージの発現ベクターに組み込んだ。大腸菌TG1にファージを感染させ、組換体ファージを回収した後、パニングによってマンノース、N-アセチルガラルトサミン、N-アセチルグルトサミン、フコースの4種類のそれぞれの糖に結合するファージクローンを回収した。同様に、シアル酸結合性のMAHレクチンに関しても糖結合部位に相当するcDNA上に改変を導入した。BPAレクチンライブラリーではループの長さに関して変異は導入せず同じ長さに固定したが、MAHレクチンに関しては、ループの長さについても異なるレクチンライブラリーを作成した。改変MAHレクチンライブラリーをGST融合蛋白質として発現させたところ、変異を導入していない野生型と同じヒト赤血球凝集能を持つクローンがいくつか存在したが、いずれも糖鎖レベルでは異なる結合特異性を示した。このことから、ループの長さも含めアミノ酸の改変を行うことにより、異なる特異性を持つレクチンをMAHレクチンにおいても示された。また、これらのクローンについて、導入した変異の同定を、ダイデオキシ法による塩基配列を決定して行った。また、MAHレクチン改変ライブラリーをλ fooファージ・T7ファージディスプレイシステムの系によって作成した。

Research Products

• [Publications] 山本一夫: "Analysis of Asparagine-linked oligosaccharides by sequential lectin-affinity chromatography" Methods in Mol.Biol.76. 35-51 (1998)
• [Publications] 飯田慎一郎: "Interaction of human macrophage C-type lectin with O-linked N-acetylgalactosamine residues on mucin glycopeptioes" J.Biol.Chem.274(印刷中). (1999)