1998 Fiscal Year Annual Research Report
有害有機化合物分解のためのチトクロームP450遺伝子組込微生物の開発
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10680546
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
井勝 久喜 岡山大学, 環境管理センター, 助手 (10260663)
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| Keywords | チトクロームP450 / 有害有機化合物 / 微生物分解 / 2-エトキシフェノール / 酵素精製 / Corynebacterium sp. |
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| Research Abstract |
チトクロームP450を産生する細菌を環境中から分離しようとする試みはほとんど行われていなかった。我々は,M9最少培地に8種類のP450の誘導剤を加え,P450を産生する細菌を環境中から分離することを試み,2-ethoxyphenolを単一炭素源とした培地により6株(EP1〜EP6株),2-methoxyphenolを単一炭素源とした培地により1株(MP1株),camphorを単一炭素源とした培地により1株(CP1株)のP450産生細菌を分離した。P450産生細菌は環境中に広く分布していることが明らかとなり,環境中における有害有機化合物の分解に細菌のP450が関与していることが示唆された。これら8株の基礎的性質を検討した結果,EP1株は2-ethoxyphenol及び4-ethoxybenzoic acidを単一炭素源として生育したときに,また,MP1株は2-mthoxyphenol以外にlinaloolを単一炭素源として生育したときにP450を産生していた。なお,これら8株はグルコース等の一般的な生育基質で生育したときにはP45Qを産生していなかった。P450阻害剤であるmetyraponを培地に添加し,各株の増殖を検討した結果,P450誘導剤を単一炭素源とした培地で増殖が阻害された。この結果から,これらの株は産生するP450を用いてP450誘導剤を資化していることが明らかとなった。
8株のP450産生細菌のうちCorynebacterium sp.と同定されたEP1株の産生するP450(P450_<EP1>)をゲルろ過及び陰イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。その結果,P450_<EP1>の分子量は約45kDaであることが明らかとなった。P450_<EP1>のN末端アミノ酸配列を解析した結果,Rhodococcus rhodochrous 116株の産生するP450_<RR1>と類似性が高いことが明らかとなった。さらに,ほうれん草のフェレドキシン及びフェレドキシンレダクターゼを用いてP450_<EP1>の代謝再構成系を確立した。この代謝系により有害有機化合物分解活性を検討した結果,P450_<EP1>は、benzene,toluene,carbon tctrachloride,1.1.1-trichloroethaneを代謝することが明らかとなった。
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Research Products
(1 results)
