1998 Fiscal Year Annual Research Report
中間径フィラメント蛋白質の構造-機能相関とリン酸化による影響
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10680674
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| Research Institution | 佐賀医科大学 |
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Principal Investigator |
安藤 祥司 佐賀医科大学, 医学部, 助教授 (20193104)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
郷原 るみ 佐賀医科大学, 医学部, 教務員 (20284664)
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| Keywords | 中間径フィラメント / 細胞骨格 / リン酸化・脱リン酸化 / 蛋白質工学 / 蛋白質間相互作用 |
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| Research Abstract |
中間径フィラメントは、細胞骨格の主要成分の一つであり、細胞質全体に広がった蛋白質繊維(直径10nm)のネットワークを形成している。中間径フィラメントを構成する蛋白質は、N末端からヘッドドメイン(HD)、ロッドドメイン、テイルドメインを持つ。このロッドドメインは、αヘリックスに富む四つのサブドメイン(1A、1B、2A、2B)を含む。これまでの解析からフィラメント形成には、少なくともヘッドおよびロッドドメインが必須であることが示されているが、蛋白質の重合に働くドメイン間相互作用の詳細は不明である。特にヘッドドメインはリン酸化・脱リン酸化酵素の標的領域であり、フィラメント構築制御に大きな影響を及ぼすがその具体的役割は不明である。そこで私達は、大腸菌に発現させた中間径フィラメント蛋白質ビメンチンとその各ドメインを用いて、ドメイン間相互作用を解析することにした。得られたビメンチンは正常なフィラメントを形成することを電顕で確認した。また、ドメインとしてHD、HD-1A、1A-1B、1B、2A-2B、2B、1A-1B-2A-2Bを量的に発現、精製した。ドメイン間相互作用の解析には、表面プラズモン共鳴センサーを用いた。これまでにHDと2Bの間に濃度に依存した相互作用が認められた。さらに合成ペプチドを用いた解析から、2Bのうち、約60残基程の領域がヘッドとの相互作用に重要であるという結果を得た。現在、ここにみられた相互作用に及ぼすリン酸化の影響やCDスペクトルによる各ドメインの立体構造を検討中である。
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