ヒガンフグ筋肉ナトリウムチャンネルcDNAの発現とその特性の解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10760043
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 山下 まり 東北大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (50192430)
• Keywords: ヒガンフグ / Na^+チャンネル / テトロドトキシン / 筋肉

Research Abstract

ヒガンフグ筋肉Na+チャンネルType2では、全長(6735bp,1880aa)に相当するcDNA断片を得てその塩基配列を決定した。次にそれらの断片の結合を行い、完了した。結合後の塩基配列の確認を2回行った。また、一方、そのアミノ酸配列を基に2種の抗ペプチド抗体を作製した。そのcDNAをT7プロモーターを有する発現ベクター(pcDNA3)に組み込み、ヒト胎児腎臓由来TSA-201細胞にトランスフェクションし、発現を試みたが、現在のところ、抗ペプチド抗体でバンドは検出されていない。この原因として、他のNa+チャンネル研究者から情報を集めたが、これまでも、Na+チャンネルの発現実験では、発現することができない例は多く、翻訳開始部の構造が問題らしい。現在も試行錯誤を繰り返している。一方、nt1376-3302の領域の2箇所において、Alternative splicingがあることが、この領域を含むRT-PCRの結果から判明した。各、クローンの塩基配列の解析から4つのパターンがあり、1のパターンのみ全長の蛋白質をコードしていた。この現象がpseudogeneやmultigeneによらないことは、Southern blotで各制限酵素で1つのバンドしかでなかったことから裏付けられた。発現を試みたcloneはこの部分をRT-PCRから得た断片で全長をコードするように置き換えたが、それが発現しない一つの原因として疑われる。

Research Products

• [Publications] Mari Yotsu-Yamashita, Bernhard Schemele, and Takeshi Yasumoto: "Isolation and Structural Assignment of 5-Deoxytetrodotoxin from the puffer fish Fugu poecilonotus"Biosci. Biotechnol. Biochem. 63. 961-963 (1999)
• [Publications] Mari Yotsu-Yamashita, Atsuko Sugimoto, Akira Takai and Takeshi Yasumoto: "Effects of Specific Modifications of Several Hydroxyls of Tetrodotoxin on its affinity to Rat Brain Membrane"J. Pharmacol. Exp. Ther.. 289(3). 1688-1696 (1999)
• [Publications] Louis Barriault, Serge L., Kenshu Fugiwar, Akio MuraiovaiLApaqutte,Mari Yotsu Yamashita: "Synthesis and Biological evaluation of the merine toyon Polycaverrosive A"Bioory & Med chem. Letl. 9. 2069-2072 (1999)
• [Publications] E.O.Nunez Vazguez,MiYoTsu Yamashita ea al.: "Toxicities and distribution of tetrodotoxin in the tissues of puffer fish found in the coast of the Baja California Peninsula, Mexico"Toxican. 28. 729-734 (2000)
• [Publications] Charles Hanwsu,Mari Yotsu-Yamashita, et al.: "Toxicity of dangerous prey : variation of tetrodotoxin levels"J. Chem. Ecology. 25. 2161-2175 (1999)
• [Publications] Mari Yotsu-Yamashita, Katsuhiko Nishimori, et al.: "Binding Properties of ^3H PbTx-3 and ^3H Saxitoxor Tv Brain Membanes and to Skeletal Muscle Membanes of puffer fish Fugu pardalis and the Primary Structure"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 267(1). 403-412 (2000)