血管内皮細胞カドヘリン複合体結合蛋白質の同定と生理機能の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10770308
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 平野 勝也 九州大学, 医学部, 講師 (80291516)
• Keywords: 血管内皮細胞 / 細胞間接触 / 増殖制御 / 接触抑制 / 脱リン酸化酵素

Research Abstract

細胞間接触による血管内皮細胞の増殖制御機構に関して、(1)細胞間接触の感知から核における増殖制御に至る細胞シグナル伝達系を、蛋白質リン酸化、遺伝子発現など、細胞生物学的な面から明らかにし、その伝達機構(蛋白質リン酸化あるいは脱リン酸化酵素、転写因子など)を分子生物学的に解明する、(2)ツーハイブリッド法を用いて、内皮型カドヘリンやその複合体と結合する蛋白質を、内皮細胞から同定することを目的に研究を行っている。初年度の研究実績は、以下の様である。
1. 培養内皮細胞の増殖及び細胞周期の評価法を確立した。Bromodeoxyuridine(BrdU)の取り込みを定量化して、内皮細胞の増殖性を解析した。増殖期の内皮細胞を、BrdUで1、4、8、12、24時間ラベルすると、BrdU陽性細胞の割合は、40、55、57、75、90%であった。一方、コンフルエントの細胞は、いずれの時間においても、BrdU陽性細胞の割合は0.1%であり、細胞間接触の完成した時期の内皮細胞は増殖を停止していることが明かとなった(Hirano et al.,1999)。
2. 内皮細胞ミオシン脱リン酸化酵素を同定した。初めに平滑筋で同定されたミオシン脱リン酸化酵素調節サブユニット(MYPT1)が内皮細胞にも発現し、細胞増殖の停止に伴い細胞内局在が変化することを明らかにした(Hirano et al.,1999)。増殖が盛んな時期の内皮細胞では、MYPT1はストレスファイバーと同様の分布を示したが、コンフルエントの時期では、細胞膜直下に局在した(Hirano et al.,1999)。また、プラークハイブリダイゼーションにより内皮細胞cDNAライブラリー検索を行い、平滑筋のMYPT1と相同性の高い蛋白質であることを明らかにした(Hirano et al.,1999)。
3. 内皮型カドヘリン、プラコグロビン、βカテニンを、内皮細胞ライブラリーからクローニングした。ツーハイブリッド法を用いて、ブラコグロビンとβカテニンは、内皮型カドヘリンの同じ細胞質領域に結合することを明らかにした(未発表)。

Research Products

• [Publications] Hirano M,Niiro N,Hirano K et al.: "Expression,subcellular localization,and cloning of the 130-kDa regulatory subunit of myosin phosphatase in porcine aortic endothelial cells" Biochemical and Biophysical Research Communications. 254. 490-496 (1999)
• [Publications] Zhou YB,Hirano K,et al: "NH_1-terminal fragments of 130 kDa subunit of myosin phosphatase increases Ca^<2+> sensitivity of the porcine renal artery" Journal of Physiology. 印刷中. (1999)
• [Publications] Zhou YB,Nishimura J,Hirano K,et al.: "The exogenously added small subunit of smooth muscle myosin phosphatase increases the Ca^<2+> sensitivity of the contractile apparatus in the permeabilized porcine renal artery." Biochemical and Biophysical Research Communications. 印刷中. (1999)
• [Publications] Yasutsune T,Kawakami N,Hirano K,et al.: "Vasorelaxation and inhibition of the voltage-operated Ca^<2+> channels by FK506 in porcine coronary artery." British Journal of Pharmacology. 印刷中. (1999)
• [Publications] Kawasaki J,Hirano K,et al.: "Mechanisms of vasorelaxation induced by troglitazone,a novel anti-diabetics,in the porcine coronary aretery." Circulation. 98. 2446-2452 (1998)
• [Publications] Niiro N,Nishimura J,Hirano K,et al.: "Mechanisms of galanin-induced contraction in the rat myometrium." British Journal of Pharmacology. 124. 1623-1632 (1998)