1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10770683
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
森岡 基浩 熊本大学, 医学部付属病院, 助手 (20295140)
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| Keywords | 一過性脳虚血 / 海馬 / 遅発生神経細胞死 / アポリポ蛋白E |
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| Research Abstract |
1) 一過性脳虚血後の内因性アポEの動態
一過性前脳虚血後の海馬遅発性神経細胞死における内因性アポE動態の検討を行った。正常組織ではわずかにアストロサイトに発現しているのみであったが、神経細胞死が明らかになる前の2日後頃より神経細胞にアポEが沈着し始め形態学的な細胞死とともにアポEが神経細胞に沈着、凝集がみられた。この間にアストロサイトにみられるアポEの発現は減少した。これらのことよりアポEは、アストロサイトと血中から(肝臓由来)神経細胞内に供給されておリアポE含有したリポ蛋白を用いて神経細胞内に選択的に投与できると考えられた、。同時に神経細胞内の燐酸化酵素などの活性が劇的に変化することも判明しアポEを用いた治療のターゲットとなり得ると考えられた。
2) アポEcDNAのクローニング
以上のことから脳および肝臓のアポEを得るためにそれぞれの組織からアポEのcDNAをクローニングした。しかしながらそれぞれのcDNAは遺伝子配列に3カ所一塩基ずつ異なる部分があることが明らかになった。これらは翻訳されるアミノ酸自体にも相違がみられるため、イソ蛋白と考えて良いのか、単にクローニングの過程で誤りを生じたものか現在検討中である。
3) アポE蛋白の精製
2)で得られたcDNAのうち最も高頻度に検出できた配列を持つクローンを用いGST-融合蛋白を得るためPGEX-ベクターを用いて大腸菌に組みこんだ後に融合蛋白を精製した。今後の実験に使用するべくその性質を分析中である。
4) 神経細胞培養法の確立
正常アストロサイトを培養後その上に海馬錐体細胞を培養する方法を確立した。今後はその神経細胞培養にたいしアポEを投与し神経細胞とアポEの相互関係を検討する予定である
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[Publications] Motohiro Morioka: "Potential role of calcineurin for brain ischemia." Progress in Neurobiology. 56. 1-30 (1998)
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[Publications] Kojiro Korematsu: "Cadherin-8 protein expression in gray matter structures and nerve fibers of the neonatal and abult mouse brain" Neuroscience. 87. 303-315 (1998)
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[Publications] Shinji Nagahiro: "Pathophysiology and treatment of cerebral ischemia" Joumal of Medical Investigation. 45. 57-70 (1998)
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[Publications] Motohiro Morioka: "Serineb/threonin phosphatase activity of calcineurin is inhibited by sodium orthovanadate and dithiotheritol reverses the inhibitory effect" Biochemical and Biophysical Research Communication. 253. 342-345 (1998)
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[Publications] Motohiro Morioka: "Activity of calcineurin and phosphatase 2A in the hippocampus after transient forebrain ischemia" Brainl Research. (in press). (1999)
