1998 Fiscal Year Annual Research Report
新しい遺伝子修復活性の測定方法の開発と悪性脳腫瘍の治療への応用
Project/Area Number |
10770700
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Research Institution | Kinki University |
Principal Investigator |
岩崎 弘充 近畿大学, 医学部, 助手 (80223387)
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Keywords | 遺伝子修復能 / PCR / 遺伝子修復能測定法 |
Research Abstract |
培養細胞に対する過酸化水素のよる遺伝子の損傷がPCRにより測定されることがF.MICHAEL YAKESとBENNETT VAN HOUTENにより報告されています(Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.94,pp.514-519,1997)。これを応用し、障害された遺伝子はPCRにより増幅されないけれど、それが修復された遺伝子はPCRにより増幅されるようになることを利用した遺伝子修復活性の測定方法を確立することが出来ました。このアッセイはマクログロブリンのcDNAをPCRのテンプレートとして、in vitroでの除去修復能の有無を検出できます。現在おこなっている方法は定性法ですが、定量的PCRを導入すれば定量法として使用できると考えています。 次にラットの肝臓からDNA-セルロース アフィニティー カラムとイオン交換カラムとゲル濾過カラムによるクロマトグラフィーを行いました。それぞれのカラムクロマトグラフィーの分画をアッセイしながら精製を行いました。そして除去修復能を有する単一ピークの分画をSDS-ポリアクリルアミド電気泳動を行い、銀染色を行ったところ50kDaの単一バンドのタンパクを精製することができました。現在このタンパクの精製を繰り返し行っています。そして集めたサンプルを用いてポリクロナール抗体の作成とアミノ酸配列をオートシークエンサーで解析する準備を行っています。これにより酵素のクローニングと同定を行う計画です。 次に手術時などに集めた臨床検体を用いて遺伝子修復能の測定を行う予定です。
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