1998 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
10780421
|
|---|
| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
|---|
Principal Investigator |
梅津 桂子 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (20223612)
|
|---|
| Keywords | 染色体異常 / ゲノムの再編 / ヘテロ接合性の喪失 / 出芽酵母 |
|---|
| Research Abstract |
染色体再編を特異的に検出できる系の構築と検出される染色体再編の分類怯、及び染色体再編領域の塩基レベルの解析法について本年度までに確立した。これらの方法を用いて出芽酵母野生株での自然発生的な染色体異常・染色体再編についての解析をほぼ終了した。
二倍体出芽酵母の片方の染色体にのみ存在する遺伝マーカーの喪失を指標にすることで、様々な染色体変化を充分に検出できることが判った。ヘテロに存在する複数の遺伝マーカーによる染色体再編の遺伝学的分類や、パルスフィールド電気泳動やPCRを用いての染色体形態の解析により、それぞれの異常染色体についてその発生メカニズムに基づいた分類を行い得る解析系とした。第III染色体下腕中央に挿入したURA3マーカーの喪失の発生率は世代当たり1.1×10^<-5>であり、その内訳は多い順に染色体喪失(56%)、相同染色体間の交叉(34%)、相同染色体間の不等交叉(4.5%)、単一染色体内欠失(2.6%)、転座(1.0%)、遺伝子変換(0.3%)となった。また、染色体間の相互作用にリンクして生じたと考えられる染色体喪失例も検出された(2.6%)。
定量的なPCRを用いて染色体該当領域の細胞内コピー数を決定する方法を確立し、この情報をもとに対象染色体の任意の位置について染色体切断点を含む領域のクローニングとその解析が可能になった。PCRに際して蛍光ラベルしたプライマーを用い、DNA配列自動解析装置を用いてPCR産物量を定量することで、複数のサイトについて同時に確実な定量を行う事が可能となり、多数の細胞についての解析が系統的に行い得る系とできた。第III染色体について単一染色体内で生じた欠失はMAT-HMRの相同配列間での組換えであったのに対し、不等交叉や転座といった染色体間の組換えは主にレトロポゾンTyで生じたものが殆どであることが明らかになった。
|
-
[Publications] Keiko Umezu et,al: "Genetic Andysio of Yeast RPA Reveds Its Multiple Functions in DNA Metabolism" Genetics. 148. 989-1005 (1998)
-
[Publications] Clark Chen et,al: "Chromosome Rearrangement Occure in S.cerevisiol rfal Mutato Mutants Due to Mutogenic Lesions Processed by Double-Strand Break Repair" Molecular Cell. 2. 9-22 (1998)
-
[Publications] Sang Eun Lee et,al: "Saccharomyus Ku70,Mrell/Rad50 and RPA proteins Pegnlate Adaptation to G2/M Arrest after DNA damage" Cell. 94. 399-409 (1998)
