1999 Fiscal Year Annual Research Report

Yeast three-hybrid法によるp53分解に関与する分子の研究

Research Project

Project/Area Number	10780423
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	畠山鎮次九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (70294973)
Keywords	p53 / Yeast three-hybrid法 / ユビキチンリガーゼ / SCF複合体 / 蛋白分解 / FWD1
Research Abstract	p53はE6とユビキチンリガーゼE6-APにより3量体を形成し、E6-APによってエビキチン化され、その後、プロテアソームにより分解を受ける。これは、HPV感染化での病理学的状況下であるが、生理学的にもp53はユビキチン化を介して、比較的短い半減期(t1/2=20分)で分解を受ける。よって、E6に相当する内因性分子が存在し、p53分解を調節している可能性がある。本研究は、E6に相当する内因性分子が存在すると仮定し、p53とE6-APと3分子複合体を形成する新たなる遺伝子をクローニングすることを目的とし、3分子が複合体を形成するときに、目的とする第3の遺伝子をクローニングする方法(Yeast three-hybrid法)を開発を行った。Yeast three-hybrid法は、p53の生理的分解機序のみならず、細胞生物学上において重要となる分子間結合を検索する画期的な手段となることが期待される。また、p53を始め、細胞周期を調節する分子(サイクリン、CDKインヒビターなど)の発現が合成のみならず、分解(特にユビキチン化)により制御されていることが報告され始めている。特に、酵母における先駆的研究により、Skp1/Cul-1/F-box蛋白複合体(SCF複合体)は、細胞周期をはじめ、さまざまな細胞機能に関与する分子の発現調節を行っていることが報告されている。我々は、酵母におけるアナロジーを利用して、マウスにおけるSkp1、Cul-1及び複数のF-box蛋白を同定した。我々がFWD1として同定したF-box蛋白は、免疫学上重要であるNF-kBの抑制分子であるlkBαと、大腸癌に関与するβ-cateninのユビキチン化、及び分解に関与していることが明らかとなった。この結果は、酵母以外の真核細胞におけるSCF複合体によるユビキチン化介在性分解の初めての報告となる。

Research Products

(9 results)

All Other

All Publications (9 results)

[Publications] Y.Tojima: "NAK,a novel lκB kinase-activating kinase."Nature. (in press). (2000)
[Publications] M.Ato: "Delayed clearance of zymosan-induced granuloma and depressed phagocytosisof macrophages with concomitant upregulated kinase activities of src-family in a human monocyte chemoattractant protein-1 transgenic mouse."Immunobiol.. 201. 432-449 (1999)
[Publications] M.Miura: "Structure and expression of the gene encoding mouse F-Box protein,Fwd2."Genomics. 62(1). 50-58 (1999)
[Publications] K.L.Lorick: "RING Fingers Mediate Ubiquitin Conjugating Enzyme (E2)-Dependent Ubiquitination."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 96(20). 11364-11369 (1999)
[Publications] K.Hattori: "Molecular dissection of the interactions among IκBα,FWD1,and Skp1 required for ubiquitin-mediated proteolysis of lκBα."J.Biol.Chem. 274(42). 29643-29647 (1999)
[Publications] M.Shirane: "Common pathway through the F-box protein FWD1 for ubiquitination of IκBα,IκBβ and IκBε"J.Biol.Chem. 274(40). 28169-28174 (1999)
[Publications] M.Shirane: "Down-regulation of p27^<Kip1> by two mechanisms,ubiquitin-mediated degradation and proteolytic processing."J.Biol.Chem. 274(20). 13886-13893 (1999)
[Publications] M.Kitagawa: "An F-box protein,FWD1,mediates ubiquitin-dependent proteolysis of β-catenin."EMBO J.. 18(9). 2401-2410 (1999)
[Publications] S.Hatakeyama: "Ubiquitin-dependent degradation of IκBα is mediated by a ubiquitin ligase Skp1/Cul1/F-box protein FWD1."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 96(7). 3859-3863 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

Yeast three-hybrid法によるp53分解に関与する分子の研究

Principal Investigator

畠山 鎮次 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (70294973)

Research Products

[Publications] Y.Tojima: "NAK,a novel lκB kinase-activating kinase."Nature. (in press). (2000)

[Publications] M.Ato: "Delayed clearance of zymosan-induced granuloma and depressed phagocytosisof macrophages with concomitant upregulated kinase activities of src-family in a human monocyte chemoattractant protein-1 transgenic mouse."Immunobiol.. 201. 432-449 (1999)

[Publications] M.Miura: "Structure and expression of the gene encoding mouse F-Box protein,Fwd2."Genomics. 62(1). 50-58 (1999)

[Publications] K.L.Lorick: "RING Fingers Mediate Ubiquitin Conjugating Enzyme (E2)-Dependent Ubiquitination."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 96(20). 11364-11369 (1999)

[Publications] K.Hattori: "Molecular dissection of the interactions among IκBα,FWD1,and Skp1 required for ubiquitin-mediated proteolysis of lκBα."J.Biol.Chem. 274(42). 29643-29647 (1999)

[Publications] M.Shirane: "Common pathway through the F-box protein FWD1 for ubiquitination of IκBα,IκBβ and IκBε"J.Biol.Chem. 274(40). 28169-28174 (1999)

[Publications] M.Shirane: "Down-regulation of p27^<Kip1> by two mechanisms,ubiquitin-mediated degradation and proteolytic processing."J.Biol.Chem. 274(20). 13886-13893 (1999)

[Publications] M.Kitagawa: "An F-box protein,FWD1,mediates ubiquitin-dependent proteolysis of β-catenin."EMBO J.. 18(9). 2401-2410 (1999)

[Publications] S.Hatakeyama: "Ubiquitin-dependent degradation of IκBα is mediated by a ubiquitin ligase Skp1/Cul1/F-box protein FWD1."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 96(7). 3859-3863 (1999)

畠山鎮次九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (70294973)