1998 Fiscal Year Annual Research Report
マイクロチップを用いたアフィニティーエレクトロフォレーシスの開発
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10875156
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
中村 和行 山口大学, 医学部, 教授 (90107748)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤本 正憲 山口大学, 医学部, その他(教務員) (60144961)
田中 経彦 山口大学, 医学部, 助教授 (20144925)
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| Keywords | マイクロチップ / マフィニティーエレクトロフォレーシス / 自己免疫疾患 / 自己抗原 / 抗DNA抗体 / 固定化DNA膜 / 超微量検出法 / 分子センター |
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| Research Abstract |
自己免疫疾患(SLE)患者血清中の自己抗原複合体を分離・定量するために、マイクロチップのシリコン膜上に抗DNA抗体を固定化してf moleの超微量自己抗原を特異的に高速分離するアフィニティーエレクトロフォレーシス(AEP)を開発する目的で研究を行った。現在までのところ以下の成果を得ており、一部を発表した。1)十分に研究説明を行った後、同意が得られたSLE患者から血液を採取して調製した新鮮血清中の抗DNA抗体を2次元電気泳動法で分離したところ、ループス腎炎を併発している患者血清中にヘパリンと強く結合する等電点の高い抗DNA抗体分子種が特異的に認められた。この抗体分子が腎糸球体基底膜に存在するグリコサミノグリカンと複合体形成して、基底膜の炎症を惹起することが示唆された[Electrophoresis(1998)19,1511-15]。2)2次元AEPを用いて血清中の抗原特異ポリクローナル抗体をモノクローナル抗体分子種に分離し、in vivoでの抗原刺激による抗体のサブクラス変換や親和性成熟を明らかにした[J.Chromatography B(1998)715,125-36]。3)数nLの血液中に含まれる超微量の抗体を同定するため,AEPで分離した抗体分子をポリビニリデンヂフルオリド(PVDF)膜に転写した後に、免疫化学蛍光発光法を用いて1ng以下の抗体を同定した[Electrophoresis(1998)19,1506-10]。4)マイクロチップAEPのモデル実験としてキャピラリー電気泳動法による血清中の微量成分の定量法を確立した[Methods in Molecular Medicine(1999)27,掲載予定]。5)マイクロチップのシリコン薄膜上にDNA断片あるいは抗DNA抗体を固定化するためのシリコン膜表面の化学処理方法についてアミノアルキル化の有用性を検討しているが、固定化率や処理後のブロッキング方法に満足できる結果が得られていない。
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[Publications] Kazuyuki NAKAMURA: "Review:Affinity electrophoresis and its applications to studies of immune response" Journal of Chromatography B. 715・1. 125-136 (1998)
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[Publications] Junko KOHRO-KAWATA: "Highly cationic anti-DNA antibodies in patients with Lupus rephritis analyzed by two-dimensional electrophoresis and immunoblotting." Electrophoresis. 19・8. 1511-1515 (1998)
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[Publications] Pei WANG: "Effects of carriers and hapten array on the production of anti-hapten antibodies analyzed by two-dimensional affinity electrophoresis" Electrophoresis. 19・8. 1506-1510 (1998)
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[Publications] Yuji NAGASAKA: "Modulation of the heat-induced activation of Mitogen-activated protein(MAP)kinase by Quercetin" Biochemical Pharmacology. 56. 1151-1155 (1998)
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[Publications] Masanori FUJIMOTO: "Analysis of heat shock-induced monophosphorylation of Stathmin in human T lymphoblastic cell line JURKAT by two-dimensional affinity electrophore" Electrophoresis. 19・15. 2515-2520 (1998)
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[Publications] Yusuke MIMURA: "Eridence of intra- and exfracellular modifications of monoclonal IgG polypeptides chains generating charge heterogeneity" Electrophoresis. 19・5. 767-775 (1998)
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[Publications] 中村和行: "最新電気泳動実験法 -親和電気泳動法-" 三浦裕士(医歯薬出版株式会社), 488 (1999)
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[Publications] Toshiko UEDA: "Methods in Molecular Medicine,-Clinical application of Capilbry Electrophoresis(発行予定)" Ed.S.M.Palfrey.Human Press Inc.,Totwa,NJ., (1999)
