アルタナティブスプライシングを調節する遺伝子の新規クローニング法の開発

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10876018
• Research Institution: Gifu University
• Principal Investigator: 鈴木 徹 岐阜大学, 農学部, 助教授 (20235972)
• Keywords: アルタナティブスプライシング / FGFR2 / GFP / 遺伝子クローニング / ミニジーン / 前立腺がん

Research Abstract

アルタナティブスプライシングのモデル系として、ラット線維芽細胞増殖因子受容体タイプ2 (FGFR2)を用いた。FGFR2は、選択的エキソンとしてIIIbエキソン及びIIIcエキソンを持つ。そして、上皮系の細胞では、IIIbエキソンを選択するタイプのスプライシングをし、がん化に伴ってIIIbエキソンからIIIcエキソンを選択するタイプに様式が変化する。
FGFR2のIIIb-IIIc領域をもつミニジーン(昨年度にクローン化、未発表)の3′側に、レポーター遺伝子として緑色蛍光タンパク質(GFP)の構造遺伝子をリーディングフレームに合わせて導入した。さらにIIIbエキソンにストップコドン(TAA)あるいはフレームシフト変異を導入したミニジーンを構築した。
ラット前立腺ガン由来の細胞のうち悪性度の低いDT3株は、IIIbエキソンを選択したFGFR2(FGFR2IIIb)のみを発現し、悪性度の高いAT3株は、IIIcエキソンを選択したFGFR2(FGFR2IIIc)のみを発現している。これらの細胞に上記のキメラミニジーンを導入し、蛍光顕微鏡で観察したところ、AT3株のみでGFPによる蛍光が観察された。
また、IIIcエキソンにストップコドン(TAA)を導入したミニジーンを構築し、DT3株及びAT3株に導入し蛍光顕微鏡で観察したところ、DT3株のみでGFPによる蛍光が観察された。今後、これらのミニジーン及び細胞株を用いて、アルタナティブスプライシングを調節する新規の因子のクローニングを行っていく予定である。