1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10877019
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
萩原 正敏 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所 (10208423)
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| Keywords | CAMP / GFP / CREB / KID |
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| Research Abstract |
申請者は細胞外からのシグナルがcAMPやカルシウムの上昇を介して、核内の遺伝子発現を制御するシグナルカスケードについて研究を行ってきた。転写因子CREBはA-kinaseによって活性化されるが、最近他のシグナルカスケード(CaM kinasesやMAP kinases)でも活性化され得る可能性が見出されている。そこで、本研究では、互いに異なる蛍光スペクトルを有する2種の緑色蛍光蛋白質Green Fluorescent Protein (以下GFPと略す)とCREBリン酸化ドメイン(以下KIDと略す)を繋いだキメラ蛋白を作り、KIDのリン酸化を蛍光スペクトルの変化としてモニターすることにより、細胞内での転写因子CREB活性化をリアルタイムでかつ定量的に観察することを試みた。このキメラ蛋白cDNAを組み込んだpQEベクターを導入した大腸菌から精製したキメラ蛋白が、CREBと同程度にA-kinaseなどでリン酸化をされることをin vitroで確かた。リン酸化の前後での蛍光変化を蛍光スペクトロメーターで調べたところ、リン酸化による蛍光変化が認められた。今後このキメラ蛋白が細胞内でのA-kinase活性のモニターに使えるか否か検討していく。
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[Publications] Okamoto,Y.,Onogi,H.,Honda,R.,Yasuda,H.,Wakabayashi,T.,Nimura,Y.,& Hagiwara,M.: "cdc2 kinasa-mediated phosphorylation of splicing factor SF2/ASF." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1999)
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[Publications] Yoshida kazuhilo,Imaki Junko.Okamoto Yoshichika,Iwakabe Hideki,Fujisawa Hitoshi,Matsuda Akira,Nakanisi Shigetada,Matsuda Hidehiko,and Hagiwara M.: "CREB-induced transcriptional activation depends on mGluR6 in rod bipolar cells." Mol.Brain Res.57,. 241-247 (1998)
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[Publications] Shimomura Atsushi,Okamoto Yoshichika,Hirata Yoko,Kobayashi Makoto,Kawakami Kiyoshi,Kiuchi Kazutoshi,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Dominant Negative ATF1 Blocks Cyclic AMP-Induced Neurite Outgrowth in PC12D Cells." J.Neurochem.70,. 1029-1034 (1998)
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[Publications] Muro Yoshinao,Ogawa Yasushi,Kato Yoshihiro,Hagiwara M.: "Autoantibody to thioredoxin reductase in an ovarian cancer patient." Biochem.Biophys.Res.Commun.242,. 267-271 (1998)
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[Publications] Kuroyanagi Noriyo,Onogi Hiroshi,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Novel SR-protein-specific kinase,SRPK2,disassembles nuclear speckles." Biochem.Biophys.Res.Commun.242,. 357-364 (1998)
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[Publications] Kamimoto Takahiro,Nagai Yasuo,Onogi Hiroshi,Muro Yoshinao,Wakabayashi Takashi,Hagiwara M.: "Dymple,a Novel Dynamin-like High Molecular Weight GTPase Lacking a Proline-rich C-terminal Domani in Mammalian Cells." J.Biol.Chem.273,(2),. 1044-1051 (1998)
