ヘミデスモソームの膜タンパク質BP180の分子病因学的研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10877135
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 尾張部 克志 名古屋大学, 情報文化学部, 助教授 (90109257)
• Keywords: ヘミデスモソーム / 類天疱瘡抗原 / 細胞接着

Research Abstract

本研究は細胞・基質間接着装置へミデスモソームに存在する膜タンパク質BP180分子の切断断片の生化学的、免疫化学的性質を調べ、線状IgA水庖症の主要抗原との関係を明らかにすること、さらにBP180の切断と抗原性の関係を解析することを目的に行った。具体的には次のような成果を得た。
1 培養角質細胞では一部のBP180分子は細胞膜近くで切断され、分子の細胞外部分が120kDの断片として培養液中に放出されてくるので、この培養上清画分からモノローナル抗体を用いたアフィニティー力ラム法で120kDのBP180分子の細胞外断片を精製した。
2 120kD断片は条件により、100kD断片となるのでBP180の異なる部位に対するエピトープをもつ数種類のモノクローナル抗体を用いて、120kDと100kD断片の関係を解析し、100kD断片は120kD断片のC端側が切断されて生じることを明らかにした。
3 120kDと100kD断片をそれぞれ精製し、低角度回転蒸着法で両分子の形態を直接観察し、その解析から生化学的結果と一致することを確認した。
4 単離した120kDおよび100kD断片と線状IgA水疱症患者血清の反応性を免疫ブロット法で調べた結果、これらの断片は線状IgA水疱症の抗原であると同定した。
5 線状IgA水疱症患者血清中の自己抗体と類似の性質を示すモノクローナル抗体の作製に成功した。この抗体は120kDおよび100kD断片とのみ反応し、BP180分子とは反応しなかった。このことから、BP180分子の切断により、新たな抗原性が出現することが明らかになった。

Research Products

• [Publications] Okamoto,M.: "Difference between dorsal and ventral iris in lens producing potency in normal lens regeneration is maintained after dissociation and reaggregation of cells from the adult newt, Cynops pyrrhogaster." Develop.Growth and Differ.40. 11-18 (1998)
• [Publications] Hirako,Y.: "Cleavage of BP180, a 180 kDa bullous pemphigoid antigen, yields a 120 kDa collagenous extracellular polypeptide." J.Biol.Chem.273. 9711-9717 (1998)
• [Publications] Shimizu,H.: "Successful prenatal exclusion of an unspecified subtype of severe epidermolysis bullosa." Inter.J.Dermatol.37. 364-369 (1998)
• [Publications] Floeth,Y.: "Novel homozygous and compound heterozygous COL17A1 mutations associated with junctional epidermolysis bullosa." J.Invest.Dermatol.111. 528-533 (1998)
• [Publications] Hirako,Y.: "Hemidesmosomes and their unique transmembrane protein BP180." Microscopy Research and Technique. 43. 207-217 (1998)
• [Publications] Proby,C.: "Human autoantibodies against HD1 / plectin in paraneoplastic pemphigus." J.Invest.Dermatol.in press. (1999)