1998 Fiscal Year Annual Research Report
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10877188
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
石坂 重昭 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (90159715)
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| Keywords | 異種間臓器移植 / 遺伝子導入 / マンソン住血吸虫 / イヌ糸状虫 |
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| Research Abstract |
マンソン住血吸虫Schistostoma mansoniおよびDicrofilaria immitisの虫体をホモゲネートし、4Mグアネジウムイソチアネートを基本とするdegradation bufferを用いて全RNAを抽出し,その後、2回のoligo-dTセルロースカラム抽出を経て、poly-A RNAを精製した。精製poly-A RNA5ugをoligo(dT)_<12-18>プライマーおよびMMLV逆転写酵素をもちいてcDNAを合成し、EcoRIおよびNotIリンカーを付加後、α pharge(pEXcell)のlacZ内クローニングサイトにインサートし、cDNAライブラリーを構築した。大腸菌に感染させ、青/白コロニー識別にて多数の組み換えファージ感染大腸菌コロニーを得ている。一方、マンソン住血吸虫S.mansoniおよびイヌ糸状虫D.immitisの虫体ホモグネートで免疫した家兎血消より、抗S.mansoni抗体および抗D.immitis抗体を含むIgG分画をセファロースカラムにて精製し、寄生虫由来蛋白発現の検出に使用した。
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