食道癌に関与する未知なる遺伝子の同定とその構造及び機能の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10877198
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 亀山 哲章 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50276268)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 早津 成夫 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (10286502) ; 橋本 修 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00286501)
• Keywords: 食道癌 / RLGS / ゲノム解析 / クローニング / 未知遺伝子

Research Abstract

食道癌(扁平上皮癌)の遺伝子変化を、ゲノムDNAを2次元電気泳動して解祈するRestriction landmark genomic scanning法(RLGS法)を用いて、検討している。
食道癌の新鮮手術材料(5症例)の癌部、非癌部組織を採取し、ゲノムDNAを抽出後、RLGS法を施行した。オートラジオグラフィーで得られたprofileをデジタル化し、約1000のスポット化されたDNA断片を癌部、非癌部間で比較した。症例数がまだ少ないものの、癌部のみに出現するスポット変化を2箇所みとめた。これらのスポット変化と臨床病理学所見との関連性は、まだ現時点では認めていない。
そのうちの1箇所に対して、クローニングを施行した。その際には、制限酵素Not I siteのみを抽出するtrapper methodを用いた。クローニングは、trapper施行後のprofileから、目的とするスポットを直接打抜きDNAを抽出した。DNA量の確保のため、プラスミドに挿入し、大腸菌を用いて形質転換を行い、増幅させた。さらにダイデオキシ法にて、塩基配列を決定した。本遺伝子断片と他遺伝子との相同性の検索では、特記すべき相同性は認めなかったものの、木遺伝子断片をプローブとして、さらなる解析が可能と思われた。
また、今後は症例数の増加に伴って、新しい共通変化スポットの出現や、既知のスポットと臨床病理学的所見との関連性が明らかになる可能性が考えられる。