1998 Fiscal Year Annual Research Report

神経疾患の原因となる変異蛋白質の質量分析による検出と構造決定および新診断法の確立

Research Project

Project/Area Number	10877398
Research Institution	Osaka Medical College
Principal Investigator	岸川匡彦大阪医科大学, 医学部, 助手 (40268199)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	清水章大阪医科大学, 医学部, 教授 (00028581) 中西豊文大阪医科大学, 医学部, 講師 (10247843)
Keywords	トランスサイレチン / アミロイドポリニューロパチー / 質量分析 / 免疫沈降法 / 老年性全身性アミロイドーシス / アミロイド原性 / 亜硫酸塩 / 翻訳後修飾
Research Abstract	筋萎縮性側索硬化症、アミロイドポリニユーロパチー、アルツハイマー病、プリオン病などの神経変性疾患は、種々の蛋白が不溶化・凝集・沈着することによって引き起こされることがわかってきている。これらの蛋白質は一様にbeta sheet richな構造を持ち、共通のアミロイド化過程が示唆されている。申請者らは、アミロイドポリニューロパチー患者のトランスサイレチン(TTR)を、免疫沈降法と質量分析を利用し検出・診断してきた。新種2種を含む10種類の変異が簡便に検出できることを示した。この手法は、内外の複数の施設で追試され、多くの変異で確認されている。しかし、申請者らは免疫反応を利用する限り、偽陰性が存在しうることに注目し、2種類の液体クロマトグラフィーと質量分析を連結し分析するLC/LC/MS法を考案した。その結果、免役沈降法に問題がないことを確認した。また、TTRにはその分子内にfreeのシステインが一つ存在している。これにさまざまな低分子チオール化合物が結合し複数のisoformが存在することを見出した。このうち、freeTTRより80Da高質量の成分は亜硫酸(SO^-_3)が結合しているものであることを同定した。モリブデン補因子欠損症候群患者血清中では、通常数%以下である亜硫酸化TTRが、85%以上を占めていた。この疾患では、亜硫酸塩酸化酵素の欠損が知られている。蛋白質の翻訳後修飾を検出することにより、疾患の診断が可能であることを示した。遺伝的に変異したTTRのみならず、正常構造のTTRも老年性全身性アミロイドーシスを起こすことが知られている。申請者らは、free TTRと亜硫酸化TTRのアスロイド原性を比較し、free TTRにはアミロイド原性がなく、亜硫酸化TTRにアミロイド原性があることを発見した。亜硫酸塩は食品・大気汚染物質に含まれているため、更なる研究が必要である。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] M.Kishikawa,et al.: "A simple and reliable method of detecting variant transthyretins by multidimensional liquid chromatography coupled to electrospray ionization mass spectrometry." Amyloid : Int.J.Exp.Clin.Invest.6. in press (1999)
[Publications] M.Kishikawa,et al.: "A new nonamyloid transthyretin variant,G101S,detected by electrospray ionization/mass spectrometry." Hum.Mutat.,Mutation in Brief. 12. 363 (1998)
[Publications] T.Nakanishi,et al.: "Simple and defined method to detect the SOD-1 mutants from patients with familial amyotrophic lateral sclerosis by mass spectrometry." J.Neurosci.Methods. 81. 41-44 (1998)
[Publications] A.Miyazaki,et al.: "Compound heterozygosity for β^+ -thalassemia-31(A→G) and a variant with low oxygen affinity,Hb Sagami〔β139(H17)Asn→Thr〕." Hemoglobin. (in press). (1999)
[Publications] T.Nakanishi,et al.: "A new hemoglobin variant found during HbAlc measurement : Hb Hokusetsu〔β52(D3)Asp→Gly〕." Hemoglobin. 22(4). 355-371 (1998)
[Publications] M.Kishikawa,et al.: "Proceeding of VIII International Symposium on Amyloidosis" Parthenon Publishing (in press), (1999)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

神経疾患の原因となる変異蛋白質の質量分析による検出と構造決定および新診断法の確立

Principal Investigator

岸川 匡彦 大阪医科大学, 医学部, 助手 (40268199)

Research Products

[Publications] M.Kishikawa,et al.: "A simple and reliable method of detecting variant transthyretins by multidimensional liquid chromatography coupled to electrospray ionization mass spectrometry." Amyloid : Int.J.Exp.Clin.Invest.6. in press (1999)

[Publications] M.Kishikawa,et al.: "A new nonamyloid transthyretin variant,G101S,detected by electrospray ionization/mass spectrometry." Hum.Mutat.,Mutation in Brief. 12. 363 (1998)

[Publications] T.Nakanishi,et al.: "Simple and defined method to detect the SOD-1 mutants from patients with familial amyotrophic lateral sclerosis by mass spectrometry." J.Neurosci.Methods. 81. 41-44 (1998)

[Publications] A.Miyazaki,et al.: "Compound heterozygosity for β^+ -thalassemia-31(A→G) and a variant with low oxygen affinity,Hb Sagami〔β139(H17)Asn→Thr〕." Hemoglobin. (in press). (1999)

[Publications] T.Nakanishi,et al.: "A new hemoglobin variant found during HbAlc measurement : Hb Hokusetsu〔β52(D3)Asp→Gly〕." Hemoglobin. 22(4). 355-371 (1998)

[Publications] M.Kishikawa,et al.: "Proceeding of VIII International Symposium on Amyloidosis" Parthenon Publishing (in press), (1999)

岸川匡彦大阪医科大学, 医学部, 助手 (40268199)