Helicobacter pyloriに対する新規抗体薬剤の開発と高感度迅速測定

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11132264
• Research Institution: Hiroshima Prefectural University
• Principal Investigator: 宇田 泰三 広島県立大学, 生物資源学部, 教授 (20232837)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 一二三 恵美 広島県立大学, 生物資源学部, 助手 (90254606)
• Keywords: Helicobacter pylori / urease / 抗体 / 酵素 / 活性 / epitope mapping / SPR

Research Abstract

本年度の研究目標は1)抗Helicobacter pylori(HP)ウレアーゼ抗体中(HpU抗体)のエピトープマッピング、2)HpU抗体の遺伝子配列解析と発現、3)ニッケルイオン配位部位に対する抗体作製、4)HPウレアーゼを特異的に分解する抗体酵素の探索、であったので以下にこれらの結果について概説する。
(1)表面プラズモン共鳴装置を用いて、2段積層法によりHpU抗体のウレアーゼに対するエピトープマッピングを行った.その結果、HPウレアーゼの活性抑制に効果的であったHpU-2とHpU18抗体はともにα鎖の同じ領域を認識していた(活性サイトはβ鎖にあるが)。そこで、この領域のアミノ酸配列を決定するためにHPの大量培養を行い、数10mgのHPウレアーゼを取得する実験を行っている。(2)HpU-2抗体産生細胞よりMrnaを抽出し、RT-PCRを実施後、クロー二ングを行った。重鎮、軽鎖の可変領域の塩基配列より推定したアミノ酸配列を用いて、HpU-2抗体の3次元構造を分子モデリングにより計算した。その結果、面白いことに、この抗体には重鎖、軽鎖が共同して作る触媒三ツ組残基が存在していた。しかもそれは抗原認識部位の中にあるという珍しいケースであった。さらに現在、クロー二ングした遺伝子の発現に取りかかっているところである。(3)ウレーアーゼはニッケルイオンを有しており、このイオンを取り込める配列(203〜338番)を活性サイト領域としてE. coliに発現させた。精製後この136個のアミノ酸残基からなるタンパクをBALV/cに免疫し、モノクローナル抗体を作製した。合計で17クローンの抗体産生株を得た。最もウレアーゼ活性を抑制したのはUA-15で抑制率は53%であった。(4)目的とする抗体酵素の探索を急ぐため、まず、HpU-2抗体を高度に精製し、重鎖及び軽鎖の分離を行ったところである。今後、低分子のペプチドを用いて分解活性を検討する予定である。

Research Products

• [Publications] 宇田泰三・池田義弘・一二三恵美: "「Helicobacter pylori urease活性抑制抗体を用いたepitope mapping」"平成11年日本生物工学会大会・講演要旨集. 50 (1999)
• [Publications] 宇田泰三・池田義弘・一二三恵美: "「Helicobacter pylori urease活性を抑制する抗体の性質と検出法への展開」"第4回バイオテクノロジー部会シンポジウム・講演要旨集. 38. 53 (1999)
• [Publications] 西村知晃、一二三恵美、宇田泰三: "Hehlicbactor pylori 菌及びその破砕物のSPRによる検出"化学センサ,Suppliment A. 15. 148-150 (1999)
• [Publications] E. Hifumi, H. Morihara, T. Uda: "Epitope map of HpU antibodies capable of inhibiting the activity of Helicobacter pylori urease."(in preparation). (2000)