1999 Fiscal Year Annual Research Report

ヒトMSH3蛋白質の機能解析

Research Project

Project/Area Number	11146221
Research Institution	Nippon Medical School
Principal Investigator	池島三与子日本医科大学, 医学部, 講師 (30246938)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	島田隆日本医科大学, 医学部, 教授 (20125074)
Keywords	ミスマッチ修復 / DNA修復蛋白質 / ゲノム不安定性 / 発癌
Research Abstract	私達はhMSH3蛋白質の機能について以下のことを明らかにした。1)バキュロウイルス系を用いてhMSH3をhMSH2と共に発現させるとhMutSβ(hMSH2/hMSH3)を形成し、2-4塩基の挿入/欠失ミスペアに結合した。2)細胞の核抽出液を用いてhMutSα(hMSH2/hMSH6)あるいはhMutSβとミスマッチとの結合を測定する方法を確立した。3)hMSH3遺伝子が増幅しているメソトレキセート耐性細胞ではhMutSα形成の抑制、塩基置換ミスマッチ修復活性の低下、ゲノム不安定性の昂進が見られた。4)弧発性大腸癌患者のゲノムDNAを用いた解析でゲノム不安定性とhMSH3遺伝子の変異の間に相関がみられた。以上のことからhMSH3蛋白質は細胞内において挿入/欠失ミスペアの認識および修復に直接関与すると考えられ、その変異および極端な発想はゲノム安定性の維持に重要な影響を与えることが考えられた。本年度はhMSH3蛋白質の特異抗体を用いて細胞内での機能を解析した。バキュロウイルスで発現したhMSH3蛋白質あるいはhMutSβを抗原として、ポリクロナル抗体及びモノクロナル抗体を得た。hMSH3に対する抗体を細胞核抽出液に添加すると、いずれの抗体も2塩基の挿入/欠失を持つミスペアを基質にした時のミスマッチ結合活性および修復活性を阻害した。しなわちhMSH3蛋白質は細胞核において挿入/欠失を持つミスペアの認識および修復に関与することが確認された。hMSH3抗体を用いて細胞の免疫沈降反応を行うとhMSH3蛋白質の他にhMSH2蛋白質とhMLH1蛋白質が見い出され、ミスマッチ認識にはMutSホモログに加えてMutLホモログが関与することが示唆された。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Ichikawa, M. et al.: "Decreased UV sensitivity, mismatch repair activity and abnormal cell cycle checkpoints in skin cancer cell lines derived from UVB-irradiated XPA-deficient mice"Mutation Res.. (in press). (2000)
[Publications] Orimo, H. et al.: "Frameshift Mutations and a Length Polymorphism in the hMSH3 Gene and the Spectrum of Microsatellite Instability in Sporatic Colon Cancer"Jpn. J. Cancer Res.. 90. 1310-1315 (1999)
[Publications] Nakajima, E. . et al.: "Identification of the protein components of mismatch binding complexes in human cells using a gel-shift assay"FEBS Lett. 453. 85-89 (1999)
[Publications] 池島三与子他: "真核生物におけるミスマッチ修復の役割とその分子機構"実験医学. 16. 153-160 (1998)
[Publications] Orimo, H. et al.: "A novel missense mutation and frameshift mutations in the type II receptor of transforming growth factor-β gene in sporadic colon cancer with microsatellite instability"Mutation Res. Genomics. 382. 115-120 (1998)
[Publications] 池島三与子他: "癌抑制蛋白質と制癌剤 ; ミスマッチ蛋白質"癌と化学療法. 24. 1392-1399 (1997)
[Publications] 池島三与子他: "「DNA複製・修復と発癌」(松影昭夫編)のうち第II章の3「ミスマッチ修復の分子機構と発癌」"羊土社. 15 (1996)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

ヒトMSH3蛋白質の機能解析

Principal Investigator

池島 三与子 日本医科大学, 医学部, 講師 (30246938)

Research Products

[Publications] Ichikawa, M. et al.: "Decreased UV sensitivity, mismatch repair activity and abnormal cell cycle checkpoints in skin cancer cell lines derived from UVB-irradiated XPA-deficient mice"Mutation Res.. (in press). (2000)

[Publications] Orimo, H. et al.: "Frameshift Mutations and a Length Polymorphism in the hMSH3 Gene and the Spectrum of Microsatellite Instability in Sporatic Colon Cancer"Jpn. J. Cancer Res.. 90. 1310-1315 (1999)

[Publications] Nakajima, E. . et al.: "Identification of the protein components of mismatch binding complexes in human cells using a gel-shift assay"FEBS Lett. 453. 85-89 (1999)

[Publications] 池島 三与子 他: "真核生物におけるミスマッチ修復の役割とその分子機構"実験医学. 16. 153-160 (1998)

[Publications] Orimo, H. et al.: "A novel missense mutation and frameshift mutations in the type II receptor of transforming growth factor-β gene in sporadic colon cancer with microsatellite instability"Mutation Res. Genomics. 382. 115-120 (1998)

[Publications] 池島 三与子 他: "癌抑制蛋白質と制癌剤 ; ミスマッチ蛋白質"癌と化学療法. 24. 1392-1399 (1997)

[Publications] 池島 三与子 他: "「DNA複製・修復と発癌」(松影昭夫編)のうち第II章の3「ミスマッチ修復の分子機構と発癌」"羊土社. 15 (1996)

池島三与子日本医科大学, 医学部, 講師 (30246938)

[Publications] 池島三与子他: "真核生物におけるミスマッチ修復の役割とその分子機構"実験医学. 16. 153-160 (1998)

[Publications] 池島三与子他: "癌抑制蛋白質と制癌剤 ; ミスマッチ蛋白質"癌と化学療法. 24. 1392-1399 (1997)

[Publications] 池島三与子他: "「DNA複製・修復と発癌」(松影昭夫編)のうち第II章の3「ミスマッチ修復の分子機構と発癌」"羊土社. 15 (1996)