1999 Fiscal Year Annual Research Report
カルネキシンをターゲットにした遺伝性嚢胞性線維症の新規治療法の開発
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11153220
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
甲斐 広文 熊本大学, 薬学部, 助教授 (30194658)
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| Keywords | 嚢胞性線維症 / 分子シャペロン / calnexin / CFTR |
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| Research Abstract |
嚢胞性線維症(cystic fibrosis:CF)は,白色人種の間で最も頻度の高い常染色体劣性遺伝性疾患である.CF患者の約70%は,508番目のフェニルアラニンの欠損変異(ΔF508CFTR)である.この変異蛋白質はフォールディングが不完全であるために,小胞体の分子シャペロンであるcalnexin(CNX)から解離できず,小胞体に保持される.その結果,CFTRは形質膜上に発現することができない.そこで,本研究では我々が最近見い出したcalnexin isoform(iCNX)を用いた新しい遺伝子治療法について検討した.この治療法の原理は,iCNXによりCNXからΔF508CFTRの解離を促し,チャネル機能は正常なΔF508CFTRを形質膜上に発現させるというものである.まず,導入したiCNXの局在を調べるために,GFP-iCNX融合蛋白質および免疫蛍光染色法を用いて検討したところ,iCNXは小胞体内に局在することがわかった.次に,iCNXを高発現する組換えアデノウイルスを用いてCFTRのmaturationについて,Westernblotting法およびpulse-chase法を行い検討した結果,iCNXはCFTRの発現量を増加させ,さらにΔF508CFTRの小胞体保持からの解離を促すことがわかった.さらに,ΔF508CFTRが形質膜上に移行し,機能しているか否かについて125 I efflux法を用いて検討したところ,iCNX導入細胞においてCFTRが機能していることが確認された.
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Research Products
(4 results)
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[Publications] S. Tai: "Effect of deoxyribonuclease 1 on tracheal mucociliary transport and airway secretion in anaesthetized quails"Pharmacol. Rev. Commun.. 10. 257-264 (1999)
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[Publications] H. Kai: "MEF up-regulates lysozyme transcription in epithelial cells"J. Biol. Chem.. 274. 20098-20102 (1999)
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[Publications] M. Okumura: "Effects of eosinophil-granule major basic protein on phosphatidylcholine secretion in rat type II pneumocytes"Am. J. Physiol.. 276. 763-768 (1999)
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[Publications] S. Nagayama: "Characterization of CFTR expression in a human pulmonary mucoepidermoid carcinoma cell line, NCIH292 cells"FEBS Letter. 455. 215-218 (1999)
