1999 Fiscal Year Annual Research Report
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11162208
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
千葉 滋 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60212049)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
熊野 恵城 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
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| Keywords | Notch / Notchリガンド / DSL蛋白質 / 分化抑制 |
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| Research Abstract |
マウスJagged1、Jagged2およびDelta1(DSL蛋白質)の全長をコードするcDNAをクローニングし、可溶型および膜結合型DSL蛋白質の血液細胞への結合を調べた。可溶型DSL蛋白質は、Delta1>Jagged1>Jagged2の強さの順に、造血細胞上のNotch2に結合した。可溶型Jagged1の結合にはDSL領域の他、N端側の2つのEGFリピートが重要であった。一方、膜結合型DSL蛋白質のNotch2への結合は、リガンド間であまり差がなかった。次に、RBP-Jk結合配列を含むプロモーターをルシフェラーゼ遺伝子につないだレポーターを用いて、Notch2発現細胞へのシグナル伝達を解析した。全長の膜結合型リガンドはNotch2発現依存性にレポーターを活性化した。この過程で、Notch2分子に切断が起こり、切断されたNotch2の細胞内部分が核内に移行すること、および核内に移行したNotch2断片がリン酸化を受けていることを示した。
一方、G-CSFによる好中球へ分化するマウス骨髄細胞株32D、およびアクチビンAによりヘモグロビン産生細胞へ分化するマウス赤白血病細胞株F5-5のそれぞれに、活性化型Notch1を導入することにより、32DのG-CSFによる好中球への分化、およびF5-5のアクチビンAによるヘモグロビン産生細胞への分化は著明に抑制された。活性化型Notch1を導入した32D細胞に、RBP-Jk機能を抑制するKYOT2をさらに導入することにより、Notch1による好中球分化抑制作用が解除された。これらのことは、造血細胞の各系統への分化がNotchの活性化によって抑制され、その抑制がRBP-JKを介するものであることを示している。
以上から、全長型DSL蛋白質が、Notchを介して造血細胞の分化を制御する可能性が示された。
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[Publications] Shimizu K, Chiba S, Kumano K, Hosoya N, Takahashi T, et al.: "Mouse Jagged1 Physically interacts with Notch2 and other Notch receptors: assessment by quantitative methods"Journal of Biological Chemistry. 274・46. 32961-32969 (1999)
