肝細胞の細胞周期調節におけるシンクロナイゼーションの分子機構の解明

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11167277
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 長原 光 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (50172549)
• Keywords: PVLA / 肝細胞 / 細胞増殖 / アポトーシス

Research Abstract

肝細胞における細胞接着と細胞増殖、アポトーシスとの関係を明らかにする目的で、できるだけ単純化したシステムを構築するため、PVLA(poly-N-vinylbenzil-β-D-lactanamide)分子をポリスチレンデイッシュ上に固相化しこの上で、細胞を成育させることとした。PVLAはアシアロ糖蛋白受容体と特異的に結合することが既に明らかになっているが、細胞接着に関する報告はない。PVLA濃度を1ug/ml,100ug/mlに設定レ、この上に継代肝癌細胞HuH7を成育させ、細胞数の増加を経時的に測定した。コントロールとして1%BSA(仔牛血清)でデイッシュ表面をブロッキングしたものを用いた。細胞が接着しなければ、増殖抑制が生ずるとの仮説を証明するためにこの実験を設定したが、肝癌細胞は1%BSA存在下では最初の増殖過程こそ緩徐であったが、その後通常の培養条件のものとほぼ同一の増殖曲線を呈した。PVLA下でも同様であった、これは肝癌細胞では細胞接着が増殖には必須ではなく、anchorage independent growthを行う事を示している。次に、不死化しているが形質転換しているラツト肝細胞株を使用し同様な実験を行った。この場合には、1%BSA存在下で細胞は浮遊し、48時間後には殆どの細胞は死滅してしまった。一方PVLA存在下では10%ほどの細胞が接着しこれは通常の増殖速度で増加した。残り90%は死滅していた。これら浮遊細胞の核をPI染色し、FACSで解析するとsubG1期の細胞が12時間より出現しており、アポトーシスにより細胞が死滅していることが判明した。さらに現在初代肝細胞にても同様なことが観察されるか検討中である。

Research Products

• [Publications] Hikaru Nagahara: "Transforming growth factorβ targetted inactivation on cyclin E : cyclin-dependent kinase12 (Cdk2) conplexes inhibition of Cdk2 activationg kinase activity"Proc Natl Acad Sci. 21 : 96(26). 14961-14966 (1999)
• [Publications] Vocelo-Alebani A.M., Lissy N.A.,Nagahara H., et al.: "Transduction of full length TAT fusion protein directly into mammalian cells, analysis of TCR-activation induced cell death (AID)"Methods in Enzymology. (in press). (1999)
• [Publications] Gius D., Ezhevsky S.A., Becker-Hopak M., Nagahara H., et al.: "p16Znk4a peptides inhibit lypo phosphorylation of petinoblostome protein and cell cycle progression prior to activation of Cdk2 complexes in lateG1"Cancer Research. 59. 2577-2580 (1999)