クロマチン構造変換に関するATPaseおよびHATに関する解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11169207
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 葛原 隆 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (00260513)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 堀越 正美 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助教授 (70242089)
• Keywords: TFIID / PPIase / ヒストン / CIB / クロマチン / ヌクレオソーム / 加水分解酵素 / 構造解析

Research Abstract

クロマチン構造変換反応に関与する様々なタイプのクロマチン構造変換因子の構造解析を通して、クロマチンを介した機能変換反応の素過程を明らかにする。
1)新規ペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼの単離と機能解析
TFIID相互作用因子として単離したペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼの様々なレベルでの構造解析を行った。酵素ドメインの進化的保存性の検討およびそれら酵素の細胞内局在性の検討を加え、両者間において相関性が見られることを明らかにすることができ、一次構造からその因子の細胞局在性を判定することが可能になった。また、様々な機能ドメインの予想を行った上で、実際に転写調節に関与するいくつかの活性を得ることに成功した。また、核内ペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼには、特有の機能ドメインが存在することを明らかにした上で、クロマチン構造変換反応に関与する活性を得ることに成功した。
2)新規核内加水分解酵素の単離と三次構造解析
同じくTFIID相互作用因子として単離したCIBの一次構造を基に進化的な比較検討を行ったところ、原核細胞に存在する様々なタイプの加水分解酵素群と相同性を有する複数の領域が分断して現れることが明らかになった。実際にCIBが加水分解酵素活性を有することも明らかにした。現在、細胞内基質を検索中である。三次構造解析のために精製を進め、結晶を得た後、X線解析により三次構造での解像能をまず2.8オングストロームレベルで、次に1.8オングストロームレベルで明らかにするに至っている。

Research Products

• [Publications] R. Himukai et al.: "Relationship between subcellular localization and structures of catalytic domains of FKBP-type PPIases"J. Biochem.. 126. 879-888 (1999)
• [Publications] T. Munakata et al.: "A human homologue of yeast anti-silencing factor ahs has histone chaperone activity"Genes Cells. 5 (in press). (2000)
• [Publications] S.-W. Kang et al.: "Functional interaction of general transcription initiation factor TFIE with general chromatin factor SPT16/CDC68"Genes Cells. 5 (in press). (2000)