クロマチン構造変換に関するATPaseおよびHATに関する解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11169207
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 葛原 隆 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (00260513)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 堀越 正美 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助教授 (70242089)
• Keywords: TFIID / PPIase / ヒストン / CIB / クロマチン / ヌクレオソーム / 加水分解酵素 / 構造解析

Research Abstract

クロマチン構造変換反応に関与する様々なタイプのクロマチン構造変換因子の構造解析を通して、クロマチンを介した機能変換反応の素過程を明らかにする。
1)新規ペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼの単離と機能解析
TFIID相互作用因子として単離したペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼの様々なレベルでの機能解析を行った。また、核内ペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼには、特有の機能ドメインが存在することを明らかにした上で、クロマチン構造変換反応に関与する活性を得ることに成功した。この構造変換反応は、ヌクレオソームアセンブリー活性であり、ペプチジル・プロリル・シス・トランス・イソメラーゼ活性とは異なるドメインがその活性を有していることを明らかにした。現在、この領域を発現させ、大量に標品を得て、結晶化を進めている。
2)新規核内加水分解酵素CIBの単離と三次構造解析
同じくTFIID相互作用因子として単離したCIBの一次構造を基に進化的な比較検討を行ったところ、原核細胞に存在する様々なタイプの加水分解酵素群と相同性を有する複数の領域が分断して現れることが明らかになった。実際にCIBが加水分解酵素活性を有することも明らかにした。三次構造解析のために精製を進め、結晶を得た後、X線解析により三次構造での解像能をまず2.8オングストロームレベルで、次に1.8オングストロームレベルで明らかにするに至った。その結果、CIBはα/βフォールドを有する三次構造を持ち、酵素活性予想部位としてcatalytic triadを形成している3アミノ酸残基が見出された。

Research Products

• [Publications] B.Padmanabhan et al.: "Purification, crystallization and preliminary X-ray crystallographic analysis of human CCG1 -interacting factor B"Acta Cryst.. D56. 1479-1481 (2000)
• [Publications] B.Padmanabhan et al.: "Crystallization of human CCG1 -interacting factor B (CIB)"J.Crystal Growth. (in press). (2001)