モノクローナル抗体lot1抗原分子のクローニングおよび構造決定

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11170221
• Research Institution: National Institute of Genetics
• Principal Investigator: 平田 たつみ 国立遺伝学研究所, 総合遺伝研究所, 助教授 (80260587)
• Keywords: モノクローナル抗体 / 嗅索 / lot1 / 軸索ガイダンス

Research Abstract

モノクローナル抗体lot1の認識する抗原は、嗅球からの軸索伸長に時空間的に良く一致して発現する。Lot抗原がこの軸索伸長に関与するのではないかと考え、抗原分子の単離を試みた。この分子の抗原決定部位は変性しやすく、抗体を用いた生化学的精製は不可能であった。そこでCOS細胞にcDNA発現ライブラリーを導入してなるべく本来の構造に近い形でタンパク質を強制発現させ、その中からlot1抗体で染色される細胞を生じるクローンを検索しようと考えた。約100匹の胎生14.5日目マウス胚より、lot抗原を多量に発現している副嗅球を切り出し、mRNAを調整した。ここからcDNAを合成し、ほ乳類培養細胞発現用ベクターpCAGGSに組み込んで、ライブラリーを作成した。現在までにそのうち約5x10^4クローンについて、COS細胞に導入して、遺伝子の発現を試みたが、モノクローナル抗体lot1が認識するエピトープを発現するクローンは得られていない。

Research Products

• [Publications] T.Hirata and H.Fujisawa: "Envitronmental control of collateral braching and target invasion of mitral cell axons during development."J.Neurobio1.. 38. 93-104 (1999)
• [Publications] 平田たつみ, 佐藤泰史: "マウス終脳培養系を用いた軸策ガイダンス機構の解析"細胞工学. 18. 77-83 (1999)