2001 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子改変マウスを用いた生殖系列細胞の追跡と機能解析
Project/Area Number |
11234203
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
岡部 勝 大阪大学, 遺伝情報実験センター, 教授 (30089875)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 玄 大阪大学, 医学部, 助教授 (40243258)
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Keywords | 生殖細胞 / 複数分裂 / 雌雄キメラ / Cre / loxP / GFP |
Research Abstract |
緑色蛍光タンパク質(GFP)を精子の細胞小器官である先体部分に発現する精子を産生するマウスを遺伝子操作により作製した。 このマウスを用いることにより、精子の雌性生殖路内で起こす挙動を追跡することが可能になった。すなわち、精子は先体反応によるGFPを急速(3秒以内)に放出することが明らかになったが、同時に精子先体部分に存在する抗原は徐々に放出されることがわかり、先体反応がこれまでいわれてきたall or noneの反応ではなくていくつかの段階をもつ反応であることを示した。また、GFPのpH指示機能を利用して、先体反応の制御に精子が先体内のpHの変化を利用していることも明らかにした。 さらに、カルメジンKOマウスに上記の遺伝子操作マウスを交配させたものを作製した。このようなマウスでは精子がどこにあるのかを視覚的に明らかにすることができる。この系を用いて雌性生殖路内における精子の挙動を追跡した結果、カルメジンをKOしたマウスでは精子が輸卵管内に上昇できないようになっていることが明らかになった。このような雌性生殖路内における精子の追跡手法が確立されたので、種々の不妊マウスを用いた輸卵管内移行の様子の検討が可能になり、今後の受精機構の解明に役立つと思われる。 また、GPIアンカー型蛋白質であるEGFP-GPIと胎盤性アルカリフォスファターゼの遊離を指標に、マウス精巣よりGPIアンカー型蛋白質遊離因子の単離を試み、現在までに、同因子の候補とみられる分子の精製・cDNAクローニングを行い、その性状解析を進めている。
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[Publications] Nakanishi T. et al.: "Alkalinization of Acrosome Measured by GFP as a pH Indicator and Its Relation to Sperm Capacitation"Dev.Biol.. 237. 222-231 (2001)
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[Publications] Ikawa M. et al.: "Calmegin Is Required for Fertilin α/β Heterodimerization and Sperm Fertility"Dev.Biol.. 240. 254-261 (2001)
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[Publications] Funahashi H. et al.: "Nuclear Transfer of Blastomeres Expressing EGFP-Reporter Gene May Improve the Efficiency of Transgenic Cattle"CLONING AND STEM CELLS. 3. 183-190 (2001)
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[Publications] Horie K. et al.: "Efficient chromosomal transposition of a Tc1/mariner-like transposon Sleeping Beauty in mice"Proc.Natl.Acad.Sci.. 98. 9191-9196 (2001)
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[Publications] Kimura SH. et al.: "Cyclin G1 is involved in G2/M arrest in response to DNA damage and in growth control after damage recovery"Oncogene. 20. 3290-3300 (2001)
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[Publications] Kawane K. et al.: "Requirement of DNase II for defenitive erythropoiesis in the mouse fetal liver"Science. 292. 1546-1549 (2001)
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[Publications] 中西 友子 他: "体外受精-Update"鈴木 秋悦. 360 (2001)