2003 Fiscal Year Annual Research Report
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11237206
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
谷 時雄 熊本大学, 理学部, 教授 (80197516)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大島 靖美 九州大学, 大学院・理学研究院, 教授 (90037606)
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| Keywords | mRNA / 核外輸送 / 分裂酵母 / 温度感受性変異体 / Ptr5 / Ptr9 / DSS1 / 遺伝子 |
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| Research Abstract |
1.分裂酵母のmRNA核外輸送温度感受性変異株ptr5とptr9の原因遺伝子をクローニングし、解析を行った。その結果、ptr5^+遺伝子がコードする蛋白質は核膜孔因子Nup85pの分裂酵母ホモログであることが示された。ptr5変異株では蛋白質の核内外輸送は正常であったことから、Ptr5pはmRNA核外輸送特異的に機能する核膜孔因子であることが示唆された。また、ptr9遺伝子は紡錘極体(SPB)形成に関与するSfilpと同一であった。ptr9変異株では、細胞形態の異常が観察されることから、細胞周期進行の制御とmRNA核外輸送機構との間に何らかの関連がある可能性が示唆された。
2.ヒトの手足形成不全を伴う遺伝性疾患split hand/split foot病の原因遺伝子DSS1の分裂酵母相同遺伝子を欠失させると、mRNAの核外輸送に異常を示すことを昨年度までに明らかにした。今回新たにdss1欠失株のマルチコピーサプレッサーとして、プロテアソームの構成因子であるPadlpを同定した。この結果から、DSS1がプロテアソームを介して機能していることが判明した。
3.蛍光標識したftz pre-mRNAをHeLa細胞核にマイクロインジェクションしたところ、蛍光pre-mRNAは核内でSC35のスペックルと共局在してスプライシングされた後に、細胞質へと核外輸送された。イントロンを含まないcDNA由来のmRNAに比較して、pre-mRNAの方が迅速に細胞質へと輸送され、スプライシング反応が核外輸送を促進することが示された。RT-PCRを用いて蛍光mRNAが細胞内で分解されていないこと、また、転写阻害によってmRNA核外輸送が阻害されること、その際輸送されなかった蛍光mRNAが核内の新規ドメインTIDRに蓄積することを明らかにした。本実験系は、唯一のmRNA核外輸送の可視化アッセイ系として今後有用であると思われる。
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[Publications] Abul Kalam Azad: "A mutation in the gene involved in sister chromatid separation causes a defect in nuclear mRNA export in fission yeast"Biochemical and Biophysical Research Communications. 310. 176-181 (2003)
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[Publications] Takashi Ideue: "The nucleolus is involved in mRNA export from the nucleus in fission yeast"Journal of Cell Science. (in press). (2004)
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[Publications] Tomoko Andoh: "The fission yeast ptr1+ gene involved in nuclear mRNA export encodes a putative ubiquitin ligase"Biochemical and Biophysical Research Communications. (in press). (2004)
