2001 Fiscal Year Annual Research Report

真核細胞ゲノム上の複製ドメイン・レプリコンの複製機序の解明

Research Project

Project/Area Number	11239204
Research Institution	Mie University
Principal Investigator	奥村克純三重大学, 生物資源学部, 助教授 (30177183)
Keywords	DNA複製 / 出芽酵母 / 染色体バンド構造 / レプリコン / DNAファイバー / FISH / 核マトリクス / 複製フォーク
Research Abstract	1.ブロモデオキシウリジン(BrdU)を取り込むことができる出芽酵母を用いて、初期複製開始点のみラベル後、DNAファイバーを調製し、取り込まれたBrdUを蛍光抗体で検出する一方、FISHで特定ゲノム領域を異なる蛍光で同時検出した。一番染色体について同時検出に成功したが、頻度が極めて低く、パルスフィールド電気泳動して、特定染色体をゲルから切り出し、DNAファイバーを調製してBrdUと"FISH検出を行った。六番染色体の特定ゲノム領域、複製開始点の検出には個々には成功しており、さらに方法の改良を行い、複製開始頻度、変異株での解析を進める。また、白髭らと共同により、BrdU標識初期複製開始点を濃縮し、DNAマイクロアレイに供して、初期複製開始点を網羅的にマップし、これまで報告された複製開始点のうちの初期開始点を明確に示した。 2.マウス細胞において細胞周期のS期が進むにつれて複製部位が核の内部から外部へと徐々に移動し、それが分裂期染色体のR/Gバンド構造と密接に関連することを明らかにした。また、DNAファイバー上で複製フォークの進行速度を比較した結果、S期初期に比べて後期の方が速く進行し、RからGバンドに移行する時期に相当するS期中期に最も遅いことがわかった。複製フォークの進行とS期のチェックポイント制御との関連性を検討中である。一方、1コピーしかないロドプシン遺伝子領域でファイバー上で複製開始部位の検出に成功した.また、特定の複製ドメインはどの細胞周期でも安定に活性化される傾向にあるが、複製開始部位はそれほど厳密に決まってないことを明らかにした。さらに、浮遊系細胞への標識ヌクレオチド導入法も開発した。また、インプリント遺伝子の父母間の複製タイミングの制御がES細胞の段階で既に行われていること、核マトリクスへのゲノムの結合が、遺伝子の発現誘導に依存して起こることを示した。

Research Products
(11 results)

All Other

All Publications (11 results)

[Publications] Takashi Shiina: "Genomic Anatomy of a Premier Major Histocompatibility Complex Paralogous Region on Chromosome 1q21-q22"Genome Research. 11巻5号. 789-802 (2001)
[Publications] Atsushi Kohda: "Visualization of Biallelic Expression of the Imprinted SNRPN Gene Induced by Inhibitors of DNA Methylation and Histone Deacetylation"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 65巻5号. 1236-1239 (2001)
[Publications] Atsushi Kohda: "Preparation or Extended Metaphase Chromosomes from Human Cultured Cells Using a Topoisomerase II Inhibitor, ICRF-193"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 65巻5号. 1248-1251 (2001)
[Publications] Koji Yamawaki: "Identification of Human CPI-17, an Inhibitory Posphoprotein for Myosin Phosphatase"Biochemical Biophysical Research Communications. 285巻4号. 1040-1045 (2001)
[Publications] Shin-ichiro Takebayashi: "5-Aza-2'-deoxycytidine Induces Histone Hyperacetylation of Mouse Centromeric 4 Heterochromatin by a Mechanism Independent of DNA Demethylation"Biochemical Biophysical Research Communications. 288巻4号. 921-926 (2001)
[Publications] Mami Hata: "Characterization of a Processed Pseudogene of human ψHSP40 on Chromosome 2q32"DNA Sequene. 12巻4号. 293-297 (2001)
[Publications] Shin-Ichiro Takebayashi: "Mapping Sites Where Replication Initiates in Mammalian Cells using DNA Fibers"Experimental Cell Research. 271巻. 263-268 (2001)
[Publications] Mitsuyoshi Nakao: "Regulation of Transcription and Chromatin by Methyl-CpG Binding Protein MDB"Brain Development. 23巻補1号. S174-S176 (2001)
[Publications] Kazuhiro Kagotani: "Visualization of Transcription-dependent Association of Imprinted Genes with the Nuclear Matrix"Experimental Cell Research. (印刷中).
[Publications] Kazuhiro Kagotani: "Replication Timing Properties within the Mouse Distal Chromosome7 Imprinting Cluster"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. (印刷中).
[Publications] Morihiro Ito: "Up-regulated Expression of a Novel Gene in Activated Human Peripheral Blood Mono-nuclear Cells That is a Truncated Paralog of the Human System L Amino Acid Transporter1"International Journal or Biochemistry and Cell Biology. (印刷中).

2001 Fiscal Year Annual Research Report

真核細胞ゲノム上の複製ドメイン・レプリコンの複製機序の解明

Principal Investigator

奥村 克純 三重大学, 生物資源学部, 助教授 (30177183)

Research Products

[Publications] Takashi Shiina: "Genomic Anatomy of a Premier Major Histocompatibility Complex Paralogous Region on Chromosome 1q21-q22"Genome Research. 11巻5号. 789-802 (2001)

[Publications] Atsushi Kohda: "Visualization of Biallelic Expression of the Imprinted SNRPN Gene Induced by Inhibitors of DNA Methylation and Histone Deacetylation"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 65巻5号. 1236-1239 (2001)

[Publications] Atsushi Kohda: "Preparation or Extended Metaphase Chromosomes from Human Cultured Cells Using a Topoisomerase II Inhibitor, ICRF-193"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 65巻5号. 1248-1251 (2001)

[Publications] Koji Yamawaki: "Identification of Human CPI-17, an Inhibitory Posphoprotein for Myosin Phosphatase"Biochemical Biophysical Research Communications. 285巻4号. 1040-1045 (2001)

[Publications] Shin-ichiro Takebayashi: "5-Aza-2'-deoxycytidine Induces Histone Hyperacetylation of Mouse Centromeric 4 Heterochromatin by a Mechanism Independent of DNA Demethylation"Biochemical Biophysical Research Communications. 288巻4号. 921-926 (2001)

[Publications] Mami Hata: "Characterization of a Processed Pseudogene of human ψHSP40 on Chromosome 2q32"DNA Sequene. 12巻4号. 293-297 (2001)

[Publications] Shin-Ichiro Takebayashi: "Mapping Sites Where Replication Initiates in Mammalian Cells using DNA Fibers"Experimental Cell Research. 271巻. 263-268 (2001)

[Publications] Mitsuyoshi Nakao: "Regulation of Transcription and Chromatin by Methyl-CpG Binding Protein MDB"Brain Development. 23巻補1号. S174-S176 (2001)

[Publications] Kazuhiro Kagotani: "Visualization of Transcription-dependent Association of Imprinted Genes with the Nuclear Matrix"Experimental Cell Research. (印刷中).

[Publications] Kazuhiro Kagotani: "Replication Timing Properties within the Mouse Distal Chromosome7 Imprinting Cluster"Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. (印刷中).

[Publications] Morihiro Ito: "Up-regulated Expression of a Novel Gene in Activated Human Peripheral Blood Mono-nuclear Cells That is a Truncated Paralog of the Human System L Amino Acid Transporter1"International Journal or Biochemistry and Cell Biology. (印刷中).

奥村克純三重大学, 生物資源学部, 助教授 (30177183)