2001 Fiscal Year Annual Research Report
真核生物染色体のS期に於ける動態の全て-出芽酵母第六染色体をモデルとして
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11239205
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
白髭 克彦 理化学研究所, ゲノム情報比較解析研究チーム, 研究員 (90273854)
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| Keywords | 染色体 / 染色体ダイナミクス / 複製開始 / DNAチップ / ChIP-chip / 複製チェックポイント / 複製開始点 / 第六染色体 |
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| Research Abstract |
真核生物の一本の染色体のS期におけるダイナミクスを解析する目的で出芽酵母の第六染色体を用い解析を行っている。昨年度までにDNAチップを用いた蛋白結合位置の網羅的解析法(ChIP on chip 法)を技術的に確立することに成功し、今年度は主として、1)チェックポイント因子RAD53の染色体上での結合位置の解析、及び、2)複製領域のChipを用いた同定法の確立、の二項目を中心に研究を進めた。以下、項目ごとに成果をまとめた。
1)ChIP on chip法により、チェックポイント活性化時、非活性化時それぞれに於けるRAD53の染色体上の配置を検索したところ、G1期にはRAD53がS期の超初期に複製を開始する開始点である二つ開始点の上に配置されており、その配置が完全にRAD53の上流で機能するキナーゼであるMEC1キナーゼに依存することが明らかとなった。さらに、S期チェックポイント活性化時にはRAD53は複製フォークの近傍に位置することが示された。このことは、RAD53自身が複製開始-伸長を制御する因子として、MEC1依存的に開始点へロードされ、複製フォークと一緒に染色体上を移動する、或いは、チェックポイント活性化時に複製フォークにリクルートされる可能性を示している。現在、この両者の可能性を見分けるべく実験系を組んでいる。
2)出芽酵母では複製新鎖をBrdUによりラベルし、複製プロファイル等の解析に用いることは出来ない。これは、出芽酵母がチミジンキナーゼを持たないためである。我々はヘルペスウィルスのチミジンキナーゼを大量発現する酵母を用い複製新鎖にBrdUを取り込ませ、DNAチップ上で既報の複製開始点、全てを含む計144個の複製開始点を同定出来た。さらに、この方法を用いS期進行に伴う複製領域の網羅的同定と、様々な変異株に於ける複製プロファイルの測定を行っている。
以上の二つの結果を盛り込み、現在、論文作成中である。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] K.-I. Watanabe, J. Morishita, K. Umezu, K. Shirahige, H. Maki: "Involvement of RAD9-dependent damage checkpoint control in arrest of cell cycle, induction of cell death, and chromosome instability caused by defects in the origin recognition complex in Saccharomyces cerevisiae"Eukaryotic Cell. (In press). (2002)
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[Publications] Tadokoro R, Fujita M, Miura H, Shirahige K, Yoshikawa H, Tsurimoto T, Obuse C: "Scheduled conversion of replication complex architecture at replication origins of S. cerevisiae during the cell"Journal of Biological Chemistry. (In press). (2002)
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[Publications] J. M. Kim, H. Yoshikawa, K. Shirahige: "A member of the YER057c/yjgf/Uk114 family links isoleucine biosynthesis and intact mitochondria"Genes to Cells. 6. 507-517 (2001)
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[Publications] M. Radji, J.M. Kim, T. Togan, H. Yoshikawa: "The cloning and characterization of the CDC50 gene family in Saccharomyces cerevisiae"Yeast. 18. 195-205 (2001)
