ヤギにおける形質転換動物作出技術の確立と実用化に関する研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11356008
• Research Institution: Azabu University
• Principal Investigator: 舘 鄰 麻布大学, 獣医学部, 教授 (30011711)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 横山 峯介 三菱化学, 生命科学研究所・生殖工学開発室, 室長 ; 佐藤 英明 東北大学, 大学院・農学研究科, 教授 (80093243) ; 柏崎 直巳 麻布大学, 獣医学部, 講師 (90298232) ; 蜂巣 達之 株式会社シバヤギ, 代表取締役
• Keywords: 形質転換動物 / ヤギ / 精子の凍結保存 / 体外受精 / 卵成熟 / SRY / DAX1 / myostatin

Research Abstract

偶蹄類の家畜、特に比較的小型で扱いの容易なヤギ、ヒツジ、ブタなどにおける形質転換動物(トランスジェニック動物)の作出は、欧米ではすでに商業的な実用化の域に入りつつある。一方、わが国では、これらの動物を含む、家畜における形質転換動物作出技術については、まだ開発研究も十分に行われていない。本研究の目的は、わが国において、ヤギにおける形質転換動物作出技術を確立し実用化することにある。本年度には、核移植ドナー用のヤギ培養細胞株の樹立、培養細胞株における染色体解析ならびにテロメア長と継代数の相関関係の定量的解析、ヤギの卵巣内卵胞のin vitro培養系における成熟法の開発、ヤギ精子の凍結保存法の開発、ヤギの体外受精法等に関して基礎的な検討を行った。ヤギ精子の凍結保存法に関しては、特に、抗酸化剤の影響の検討を行った。何れの課題についても、まだ、研究の途上であり未解決の問題が多数残されているが、興味深い基礎データが得られつつある。一方、形質転換に用いる有用遺伝子のクローニングに関しては、myostatin,HMGI-Cなど、body sizeに関連した遺伝子、および、性決定に関与する遺伝子SRYならびにDAX1の単離とクローニング、配列決定が進行中である。また、形質転換動物作出に必要な遺伝子コンストラクトの作成に関しては、アンチセンスSRYを組み込んだ発現ベクター、抗SRYリボザイムを組み込んだ発現ベクターの構築が進行中であり、一部については、構築が完了した。これらのコンストラクトは、何れも、まず、トランスジェニックマウスを作出することを目的として作成しており、さらに、それらの成果を踏まえて、順次、ヤギに展開する予定である。マウスアンチセンスSryコンストラクトについては、トランスジェニックマウス作出の予備実験を行いつつある。

Research Products

• [Publications] S-I.Nakagawa,S.Saburi,K.Yamanouchi,H.Tojo,C.Tachi: "In vitro studies on PGC or PGC-like cells in cultured yolk sac cells and embryonic stem cells of the mouse."Arch.Histol.Cytol.. 63. 229-241 (2000)
• [Publications] B.B.Seo,C.H.Kim,K.Yamanouchi,M.Takah-shi,T.Sawasaki C.Tachi,H.Tojo: "Co-injection of restriction enzyme with foreign DNA into the pronucleus for elevating production efficiencies of transgenic animals."Anim.Reprod.Sci.. 63. 113-122 (2000)
• [Publications] H.Kagami,J.Iwata,A.Nakata,T.Tagami,Y.Matsubara,T.Harumi,C.Tachi, et al.: "Substantial evidence to localize the developmental origin of primordial germ cells in the chicken."Animal Science J.. 71. 38-41 (2000)
• [Publications] H.Inuzuka,K.Yamanouchi,C.Tachi,H.Tojo: "Expression of milk protein genes is induced directly by exogenous STAT5 without prolactin-mediated signal transduction in transgenic mice."Mol Reprod Dev:. 54. 121-125 (1999)
• [Publications] K.Miyoshi,N.Kashiwazaki,E.Sato: "Development of porcine nuclear transfer embryos reconstituted with blastocysts-derived cells and enucleated oocytes."Asian-Aus.J.Anim.Sci.. Supplement13. 201 (2000)
• [Publications] Tanaka,S.S.,Toyaoka,Y.,Akasu,R.,KatohFukui,Y.,Nakahara,Y.,Suzuki,R.,Yokoyama,M.Nose,T.: "The mouse homolog of Drosophila Vasa is required for the development of male germ cells."Genes & Development,,2000.. 14. 841-852 (2000)
• [Publications] 舘鄰: "遺伝子の機能を解析する.「家畜ゲノム解析と新たな家畜育種戦略」(分担執筆)"動物遺伝育種シンポジウム組織委員会編、畜産技術協会. 6 (2000)
• [Publications] 柏原孝夫,河本馨,舘鄰(共編): "動物遺伝学"文永堂出版、東京. 237 (2000)