2001 Fiscal Year Annual Research Report

抗原特異性と機能に関する遺伝子導入T細胞による抗原特異的免疫療法の確立

Research Project

Project/Area Number	11357006
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	山本一彦東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (80191394)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	沢田哲治東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50235470) 土肥眞東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60222155) 三崎義堅東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (60219615)
Keywords	T細胞レセプター / 免疫疾患 / 抗原特異的免疫療法 / 遺伝子導入 / 免疫細胞療法
Research Abstract	研究代表者らがすでに確立しているT細胞クロノタイプ検出法を発展させ、改変T細胞作成技術を確立し、マウスモデルにおいて抗原特異的免疫療法を行うことを目標とした。まず、自己免疫疾患の病変、移植臓器などに集積している抗原特異的T細胞クローンの状況を、そこから採取した少量のRNAから把握した上で、重要と考えられるクローンについて、T細胞レセプターの全塩基配列の情報を獲得する技術を確立し、次にこれらの遺伝子を自らのリンパ球に導入し抗原特異性を再構築することを目標とした。具体的には自己免疫疾患モデルマウス(NZB/WF1)の脾臓細胞を単一浮遊細胞とした後、FICT標識の抗TCR-Vβモノクローナル抗体(クローナリティ分析にてドミナントに用いられたVβ)にて染色しFACSにて分析後、単一細胞への分別(ソート)を行い、96穴プレートの一つ一つに1つの陽性細胞を分離した。それぞれのウェルからRNAを抽出し、cDNAを合成ののち、既に決定している染色に用いた1種類のVβプライマーおよび通常のPCR用の20種類のVαプライマーとそれぞれのC領域プライマーで別々にPCR反応を行い増幅をおこなうことで、TCRのシグナルを増幅した。このようにクローニングされた2つのT細胞レセプター遺伝子cDNAの結合ペアの中から、別に既に解析しているリンパ球集団全体の中で集積しているクローンのペアを同定した。次にこれらの全長cDNAをクローニングしてレトロウイルスベクターに組み換えた。これらをNZB/WF1マウスの脾臓細胞に遺伝子移入したところ、ヌクレオソーム特異的であることが判明した。現在、さらに抑制性サイトカイン遺伝子も導入した改変T細胞を用いて、自己免疫疾患が抑制可能かを検討中である。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Kanahata K.: "Peripheral tolerance to a nuclear autoantigen : dendritic cells expressing a nuclear autoantigen lead to persistent anergic state of CD4 autoreactive T cells after proliferation"J. Immunol.. (in press).
[Publications] Yamamoto K.: "T cells and autoimm. disease"Allergy International. 50. 1-4 (2001)
[Publications] Misaki Y.: "Game-transferred oligoclonal T cells predominantly persist in peripheral blood from on adenosine deaminase-deficient patient during gene therapy"Molcular Therapy. 3. 24-27 (2001)
[Publications] Hagiwara K.: "Identification of genes upregulated in the infamed colonic lesions of crohns disease"Biochem. bioph. res. co.. 283. 130-135 (2001)
[Publications] Yamada.R: "Association between a single-nucleotide polymorphism in the promoter of the human interleukin-3 gene and rheumatoid arthritis in Japanese patients and inaximum-likelihood estimation of combinational effect that two genetic loci have on susceptibility to the disease"Am. J. Hum. Gent. 68. 674-685 (2001)
[Publications] Setoguchi K.: "Peroxisome proliferator-activated receptor-γ haploin sufficiency enhunces B cell proliferative responses and exacerbates experimentally induced arthritis"J. Clin. Invest.. 108. 1667-1675 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

抗原特異性と機能に関する遺伝子導入T細胞による抗原特異的免疫療法の確立

Principal Investigator

山本 一彦 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (80191394)

Research Products

[Publications] Kanahata K.: "Peripheral tolerance to a nuclear autoantigen : dendritic cells expressing a nuclear autoantigen lead to persistent anergic state of CD4 autoreactive T cells after proliferation"J. Immunol.. (in press).

[Publications] Yamamoto K.: "T cells and autoimm. disease"Allergy International. 50. 1-4 (2001)

[Publications] Misaki Y.: "Game-transferred oligoclonal T cells predominantly persist in peripheral blood from on adenosine deaminase-deficient patient during gene therapy"Molcular Therapy. 3. 24-27 (2001)

[Publications] Hagiwara K.: "Identification of genes upregulated in the infamed colonic lesions of crohns disease"Biochem. bioph. res. co.. 283. 130-135 (2001)

[Publications] Setoguchi K.: "Peroxisome proliferator-activated receptor-γ haploin sufficiency enhunces B cell proliferative responses and exacerbates experimentally induced arthritis"J. Clin. Invest.. 108. 1667-1675 (2001)

山本一彦東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (80191394)