2000 Fiscal Year Annual Research Report
脂溶性生理活性物質をリガンドとする新規核内レセプターの検索
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11460035
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| Research Institution | Institute of Molecular and Cellular Biosciences, The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
加藤 茂明 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 教授 (60204468)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳澤 純 東京大学, 分子細胞生物学研究所, 助手 (50301114)
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| Keywords | 低分子量脂溶性生理活性物 / ビタミン誘導体 / 非ステロイドホルモン / ヘテロ2量体 / two-hybrid法 / VDR欠損マウス / 遺伝子プロモーター / 2重欠損マウス |
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| Research Abstract |
本研究では、下記の3点に焦点を当て、核内レセプターリガンドとして働く新規低分子量脂溶性生理活性物質同定を試みた。
1.RXRとのヘテロ2量体化を利用した新たな核内レセプターの検索:VDRをはじめとした非ステロイドホルモン型レセプターは、RXRとヘテロ2量体化することでDNAに結合、レセプター機能を発揮することが知られている。このヘテロ2量体化に着目し、RXRをプローブとしてこれと会合するレセプターを検索し、これを酵母内で発現させ、RXRとのへテロ2量体は、タンパク-タンパク相互作用に基づくtwo-hybrid法にて検出した。取得されたcDNA断片を用い、cDNAライブラリーから全長cDNAの取得を試みた。
2.組織特異的ビタミンDレセプター欠損マウスの作出と表現型の解析:標的組換えによるVDR欠損マウスの表現型の解析を行った結果、重篤なクル病を呈しており、骨形成、皮膚などに明らかな異常が認められた。更にRXRβとRXRγの2重欠損マウス(VDR-RXRβ、VDR-RXRγ)を作製し、これらの異常がVDR単独欠失より軟骨で強調されることを見出した。これら動物の表現型を詳細に解析することで、皮膚、軟骨組織においてはビタミンDが血中カルシウムを介さず直接作用することがわかった。既にCreを発現させる皮膚特異的プロモーター(K_1、K_2、K_5、K_<10>遺伝子プロモーター)や軟骨特異的プロモーター(プロコラーゲンII型遺伝子プロモーター)をもつ発現ベクターの作製に成功しており、現在共同研究者であるフランス・パスツール大学、P.Chambon教授らのグループとともに、このようなCreをもつトランスジェニックマウスを分担して作製しているところである。
3.新規核内レセプターリガンドの同定:上記の方法にて得られた新たなレセプターリガンド同定を目的にレセプターの転写促進能を活性化するリガンドを検索した。得られた新規レセプターcDNAを用いた発現ベクターにより、動物細胞内もしくは酵母内で発現させ、血清あるいは食物中の低分子量脂溶性画分を培地中に加えて、転写促進能を指標にリガンドを検索した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Watanabe,M.,Yanagisawa,J.,Kato,S., et al.: "A subfamily of RNA binding DEAD-box proteins acts as an estrogen receptor α coactivator through the N-term in al activation domain (AF-1) with an RNA coactivator, SRA."EMBO J.. 20. (2001)
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[Publications] Li,M.,Indra,A.,Kato,S., et al.: "Skin abnormalities generated by temporally-controlled RXRα mutations in adult mouse epidermis."Nature. 407. 633-636 (2000)
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[Publications] Kodera,Y.,Takeyama,K.,Kato,S., et al.: "Ligand-type specific in teractions of peroxisome proliferator-activated receptor gamma with transcriptional coactivators"J.Biol.Chem.. 275. 33201-33204 (2000)
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[Publications] Kobayashi,Y.,Yanagisawa,J.,Kato,S., et al.: "p300 Mediates functional synergism between AF-1 and AF-2 of estrogen receptor α and β by interacting directly with the N-term in al A/B domains."J.Biol.Chem.. 275. 15645-15651 (2000)
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[Publications] Fuse,H.,Kitagawa,H.,Kato,S.: "Characterization of transactivational property an dcoactivator mediation of rat mineralocorticoid receptor AF-1."Mol.Endocrinol.. 14. 889-899 (2000)
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[Publications] Tai,H.,Kubota,N.,Kato,S.: "In volvement of nuclear receptor coactivator SRC-1 in estrogen-dependent cell growth of MCF-7 cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 311-316 (2000)
